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逆轉錄 RT-PCR 聚合酶鏈反應2

發(fā)布人：admin 瀏覽次數：1125 發(fā)布時(shí)間：2017-11-08

注意事項 
       1．在實(shí)驗過(guò)程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過(guò)程中，注意避免mRNA的斷裂；
       2． 為了防止非特異性擴增，必須設陰性對照；
       3．內參的設定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Actin（β-肌動(dòng)蛋白）等。其目的在于避免RNA定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應體系中擴增效率不均一各孔間的溫度差等所造成的誤差；
       4． PCR不能進(jìn)入平臺期，出現平臺效應與所擴增的目的基因的長(cháng)度、序列、二級結構以及目標DNA起始的數量有關(guān)。故對于每一個(gè)目標序列出現平臺效應的循環(huán)數，均應通過(guò)單獨實(shí)驗來(lái)確定；

       5． 防止DNA的污染： 采用DNA酶處理RNA； 在可能的情況下，將PCR引物置于基因的不同外顯子，以消除基因和mRNA的共線(xiàn)性。


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