一、細胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測

   根據凋亡細胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設計了許多不同的細胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法。

  1 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

   （1） 未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現發(fā)泡現象，細胞凋亡晚期可見(jiàn)凋亡小體。

   （2） 染色細胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割

   2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡

    一般以細胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜藖?lái)評判細胞凋亡的進(jìn)展情況。

    常用的DNA特異性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與　DNA的結合是非嵌入式的，主要結合在DNA的A-T堿基區。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍色熒光。

    Hoechst是與DNA特異結合的活性染料，儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用時(shí)用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。

    DAPI為半通透性，用于常規固定細胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。

    結果評判：細胞凋亡過(guò)程中細胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現濃縮狀態(tài)；Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體(圖1)。

 3 透射電子顯微鏡觀(guān)察

　結果評判：凋亡細胞體積變小，細胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細胞核內染色質(zhì)高度盤(pán)繞，出現許多稱(chēng)為氣穴現象（cavitations）的空泡結構(圖2)；Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；細胞凋亡的晚期，細胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。