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外周血細胞瑞氏(Wright)染色及計數實(shí)驗


  正血液常規檢查是臨床使用最多的化驗項目,其中白細胞分類(lèi)計數又是血常規中必做化驗之一。目前,我國各地醫院化驗室在做白細胞分類(lèi)計數時(shí),其血涂片多采用瑞氏(Wright’s)染色法。瑞氏染料中有美藍和伊紅兩種成分,前者為堿性,后者為酸性,它們與細胞內的各種物質(zhì)具有不同的親和力,使其顯現出不同的色調。

  一、實(shí)驗方法涂片法


  二、實(shí)驗原理瑞氏染料中有美藍和伊紅兩種成分,前者為堿性,后者為酸性,它們與細胞內的各種物質(zhì)具有不同的親和力,使其顯現出不同的色調。血細胞核由去氧核糖核酸和強堿性的組蛋白、精蛋白等形成核蛋白。這種強堿性的物質(zhì)與瑞氏染料中的酸性染料伊紅有親和力,所以染成紅色;核蛋白中還有少量的 弱酸性蛋白,它們又與染液中的堿性染料美藍起作用而染成藍色,但含量太少,藍色反應極弱 ,故核染色呈現紫紅色。較幼稚的細胞之胞漿和細胞核之核仁中含有酸性物質(zhì),它們與染料中的堿性染料美藍有親和力,故染成藍色。


  三、實(shí)驗材料:血液

試劑、試劑盒:瑞士染料 純甲醇 磷酸二氫鉀 磷酸氫二鈉

儀器和耗材:顯微鏡 玻片 蓋玻片 滴管


  四、實(shí)驗步驟:

  1.制作血涂片
  (1)滴一小滴血(約5 ul)于干凈玻片上,推片與玻片應呈約30°角,用力均勻而較快,且不可復推。
  (2)如血滴較小,推得較慢,角度小于30°,所制涂片較薄。
  (3)如血滴較大,推得較快,角度比30°大時(shí),則所制涂片較厚。
  2.將標本放平(最好置于一個(gè)固定架上),用滴管將染液滴于涂片上,可用滴管將染液驅散,使其布滿(mǎn)整個(gè)涂片。
  3.染液布滿(mǎn)整個(gè)涂片后,稍等片刻或立即加入緩沖液,并使緩沖液與染液混均勻。
  4.染液與緩沖液的比例
  (1)染液量要充足,否則染液很快蒸發(fā),將染料沉淀于細胞上。
  (2)染液與緩沖液的比例為1:2~4左右比較合適。
  (3)稀釋度越大,染色時(shí)間越長(cháng),細胞著(zhù)色較好,反之則越差。
  5.染色時(shí)間:視具體情況而定,一般約需10~30分鐘。
  6.沖洗:用自來(lái)水沖洗涂片上之染料。

  7.顯微鏡檢查:待自然干燥后用光學(xué)顯微鏡檢查。


  五、正常血細胞形態(tài)
  1.成熟紅細胞:正常紅細胞為兩面微 凹而呈盤(pán)狀,染色后則呈中心淺染之桔紅色細胞,平均直徑7.6 um。

  2.成熟中性粒細胞:PB中有兩種,桿狀核和分葉核。桿狀核粒細胞形態(tài):圓形或橢圓形,直徑10~13 um。胞核如桿狀、帶狀,胞核之凹超過(guò)假設核圓徑的3/4,而且兩端的內外有相當一段的平行。染色質(zhì)凝固成塊狀,著(zhù)色不均勻,其間可有空白區。胞漿內已不含有嗜堿性物質(zhì),而滿(mǎn)布中性顆粒。中性分葉核粒細胞:圓形,直徑10~13 um。核呈分葉狀,少者分兩葉,多者六、七葉以上,葉與葉之間有細絲相連或完全斷開(kāi), 或互相重疊。染色質(zhì)成細塊狀。胞漿內布滿(mǎn)中性顆粒。

  3.成熟淋巴細胞:圓形,直徑5~18 um。核圓形或擬蠶豆狀,染色質(zhì)致密成團塊狀。胞漿量少,藍色,可有少許圓形、周邊整齊的嗜天青顆粒。大淋巴細胞胞漿量多,呈淡藍色

  4.單核細胞:圓形或不規則形,直徑12~20 um。胞核居中或偏一側,其形不規則。染色質(zhì)凝集如篩底狀或粗線(xiàn)條網(wǎng)狀,但無(wú)凝集的塊狀染色質(zhì)。胞漿量多,灰藍色,散布許多細小的粉紅色顆粒,顆粒多者甚至使胞漿成為粉紅色,可有空泡和外漿出現。

  5.血小板:正常血小板為星形、逗點(diǎn)狀或不規則狀,直徑2~5 um,呈淡藍色,中央推聚 干淡紫紅色的小顆粒。

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