細胞傳代的一般方法
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發(fā)布時(shí)間：2016-10-14
開(kāi)始細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細胞(單層細胞，鏡檢適合)、培養液(MEM-0.2%LH 培養液或MEM 培養液或199 等適合細胞有要求的培養液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1 萬(wàn)單位）、7.5％NaHC03 溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS 洗液。
用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1）、細胞吹打管（20 ml）(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱
操作步驟：鏡檢細胞，挑選生長(cháng)狀態(tài)良好，細胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無(wú)污染、無(wú)異常及可疑病變細胞。配制細胞培養液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養液100ml 內，加入滅活小牛血清10m1，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。消化細胞；先用PBS 洗液沖洗細胞表面1-2 次，每次10m1，棄去洗液，向細胞瓶?jì)燃尤?.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細胞瓶平放，使消化液完全覆蓋細胞表面。至細胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1 細胞培養液吹打分散細胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 細胞培養液重復吹打一次后分裝，然后補加至所需培養量。加塞，置于37±1℃孵箱培養。約2～4 天成片。(由細胞接種濃度決定)；填寫(xiě)傳代記錄。
