二維聚丙烯酰胺凝膠電泳
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發(fā)布時(shí)間：2017-10-23
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)結合了等電聚焦技術(shù)（根據蛋白質(zhì)等電點(diǎn)進(jìn)行分離）以及SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)（根據蛋白質(zhì)的大小進(jìn)行分離）。這兩項技術(shù)結合形成的二維電泳是分離分析蛋白質(zhì)最有效的一種電泳手段。
通常第一維電泳是等電聚焦，在細管中（φ1～3 mm）中加入含有兩性電解質(zhì)、8M的脲以及非離子型去污劑的聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行等電聚焦，變性的蛋白質(zhì)根據其等電點(diǎn)的不同進(jìn)行分離。而后將凝膠從管中取出，用含有SDS的緩沖液處理30 min，使SDS與蛋白質(zhì)充分結合。
將處理過(guò)的凝膠條放在SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠上，加入丙烯酰胺溶液或熔化的瓊脂糖溶液使其固定并與濃縮膠連接。在第二維電泳過(guò)程中，結合SDS的蛋白質(zhì)從等電聚焦凝膠中進(jìn)入SDS－聚丙烯酰胺凝膠，在濃縮膠中被濃縮，在分離膠中依據其分子量大小被分離。
這樣各個(gè)蛋白質(zhì)根據等電點(diǎn)和分子量的不同而被分離、分布在二維圖譜上。細胞提取液的二維電泳可以分辨出1000～2000個(gè)蛋白質(zhì)，有些報道可以分辨出5000～10000個(gè)斑點(diǎn)，這與細胞中可能存在的蛋白質(zhì)數量接近。由于二維電泳具有很高的分辨率，它可以直接從細胞提取液中檢測某個(gè)蛋白。
例如將某個(gè)蛋白質(zhì)的mRNA轉入到青蛙的卵母細胞中，通過(guò)對轉入和未轉入細胞的提取液的二維電泳圖譜的比較，轉入mRNA的細胞提取液的二維電泳圖譜中應存在一個(gè)特殊的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，這樣就可以直接檢測mRNA的翻譯結果。二維電泳是一項很需要技術(shù)并且很辛苦的工作。目前已有一些計算機控制的系統可以直接記錄并比較復雜的二維電泳圖譜。
（本文轉載丁香通）
