實(shí)驗方法原理
抗藥性細胞模型的篩選大多采取長(cháng)時(shí)間藥物處理、誘導抗性,最總篩選出具有一定抗性的細胞克隆。
實(shí)驗材料 小鼠
試劑、試劑盒 小牛血清DMEMDOX
儀器、耗材 CO2培養箱無(wú)菌鋼圈
實(shí)驗步驟
一、培養條件
用含10%小牛血清的DMEM培養液,5%CO2,37℃培養。
二、實(shí)驗步驟
1. 將CHO細胞培養在含10%血清的DMEM培養液中,先用DOX(阿霉素)0.01 ug/ml 誘導培養CHO細胞3個(gè)月。
2. 然后在3個(gè)月內逐步增倍DOX的濃度達0.1 ul/ml,接著(zhù)進(jìn)行DOX低濃度的篩選。
3. 隨后用無(wú)菌鋼圈套取抗性倍數較高的克隆RC1作CHO和RC1對DOX的劑量-反應曲線(xiàn),求CHO和RC1的IC50值。
4. 抗性倍數即為RC1的IC50與CHO的IC50。
注意事項
1. 要具備培養細胞的實(shí)驗室條件,謹防污染。
2. 通過(guò)實(shí)驗計算出敏感細胞對該藥物的IC50值,以確定其實(shí)誘導濃度。
3. 采用長(cháng)期增量的培養法可產(chǎn)生穩定的抗藥性細胞株,對阿霉素等產(chǎn)生抗性的細胞株,往往對其他天然來(lái)源的抗腫瘤藥亦可產(chǎn)生抗藥性。(轉帖)
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