1、實(shí)驗器材（從左到右）：

  第一行：干棉球、酒精棉球、10％水合氯醛＋注射器、碘伏＋棉簽

  第二行：三種不同粗細的魚(yú)線(xiàn)（魚(yú)線(xiàn)最好在2.0、2.5mm處各用記號筆作好標記，便于觀(guān)察進(jìn)入距離）、彎盤(pán)內為手術(shù)器材

  第三行：記號筆、自制拉鉤（皮筋+曲別針＋大頭針）

2、麻醉：

  可用飲料瓶自制捕鼠器（適用于不敢手抓大鼠的），用于打麻藥，根據大鼠的重量選擇不同粗細的飲料瓶（太粗了大鼠可在瓶中回頭）。

3、麻倒后綁在手術(shù)臺上

4、剪去頸前的鼠毛，碘伏消毒

5、沿經(jīng)部正中切開(kāi)皮膚

  說(shuō)明：切開(kāi)皮膚前最好將結扎動(dòng)脈的線(xiàn)事先剪好（后面會(huì )用到）。

6、鈍性分離皮下組織

  如圖：大鼠腹側可見(jiàn)事先剪好的結扎線(xiàn)。

7、分離到氣管前肌后，沿右側胸鎖乳突肌腱向下分離，見(jiàn)到頸動(dòng)脈鞘后可上拉鉤

8、分離動(dòng)脈鞘

  如圖：分離好后見(jiàn)光滑的頸總動(dòng)脈。

9、分離出頸總、頸外、頸內動(dòng)脈，結扎頸總、頸外動(dòng)脈，注意中間那根線(xiàn)不要系緊，用來(lái)插魚(yú)線(xiàn)時(shí)防止出血的。

10、夾閉頸內動(dòng)脈，用眼科剪將頸總動(dòng)脈剪一小口

11、插入魚(yú)線(xiàn)，魚(yú)線(xiàn)進(jìn)入頸內動(dòng)脈后按圖中注釋方法插（成功率在90%以上）

  說(shuō)明：

  （1）這一步魚(yú)線(xiàn)選擇是關(guān)鍵，根據大鼠重量（作的多了后根據動(dòng)脈粗細就可選擇了）選魚(yú)線(xiàn)。我們的經(jīng)驗是：250g以下的選0.26mm的線(xiàn)，250-300g的選0.26mm蘸臘的或0.28的都可以。

  （2）如果遇到魚(yú)線(xiàn)怎么也查不進(jìn)去的情況，可讓大鼠休息一會(huì )，換細點(diǎn)的魚(yú)線(xiàn)再試，這種情況不一定都是進(jìn)到翼腭動(dòng)脈了，我曾解剖過(guò)4例這種情況的大鼠，有三例都是在如顱的地方卡住了，可惜我們手里沒(méi)有0.24mm的魚(yú)線(xiàn)。

  （3）通過(guò)實(shí)踐，我們認為結扎或夾閉翼腭動(dòng)脈沒(méi)有必要，按我們的方法，熟練的話(huà)，從切開(kāi)到縫合完畢也就是15分鐘，算上準備工作（如麻醉、消毒等）半小時(shí)也可以搞定了，這樣一上午兩人作10只大鼠不成問(wèn)題。

  （4）我們體會(huì )最好用蘸臘的魚(yú)線(xiàn)作模型，好處是進(jìn)線(xiàn)深度控制的好，不容易出現蛛網(wǎng)膜下腔出血。我們曾試過(guò)0.26mm的魚(yú)線(xiàn)（不帶臘）在250g以下的大鼠進(jìn)入深度足有2.5cm

12、成功后結扎中間那根線(xiàn)，可見(jiàn)第一個(gè)標記距動(dòng)脈分叉約2mm

13、縫合

14、縫好后用酒精棉球消毒皮膚縫合處

15、縫好后的效果如圖下圖，外面的魚(yú)線(xiàn)最后用記號筆涂黑，便于再灌拔線(xiàn)時(shí)觀(guān)察。

16、將大鼠放回籠內

17、2小時(shí)再灌

18、醒后看效果

  左爪不能伸展（完全醒后可見(jiàn)繞圈或追尾、傾倒），我們的體會(huì )，癥狀2-3分的死亡率高，1-2分的死亡率低，有的大鼠第二天或幾天后可無(wú)明顯癥狀，但取腦后還是有梗死灶的。

  附：一般文獻上的MCAO制作方法＋評分標準

  局灶性腦缺血再灌注模型的制備根據longa提出的可逆性大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAo)線(xiàn)栓法并根據大鼠腦解剖結構圖加以改進(jìn)制作局灶性腦缺血再灌注模型,以10%水合氯醛0.3ml/kg腹腔麻醉,頸正中切口,暴露頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)及翼腭動(dòng)脈,將0.26mm單絲尼龍魚(yú)線(xiàn)頭端0.5cm用石蠟包被,并于20mm長(cháng)處標記,全部大鼠均通過(guò)右側CCA切口處插入,翼腭動(dòng)脈短暫夾閉以防誤插,栓線(xiàn)長(cháng)度自CCA分叉處約18～20mm,根據動(dòng)物體重而定,栓塞右側大腦中動(dòng)脈,然后縫合皮膚,栓線(xiàn)尾端部分固定于皮膚上。缺血達到2h后小心抽出栓線(xiàn),即形成再灌注。假手術(shù)對照只是不插入尼龍魚(yú)線(xiàn),其余步驟同手術(shù)組。在缺血期間及再灌注后2h保持體溫在(37±0.5)℃。模型成功的標志為以大鼠手術(shù)麻醉清醒后出現左側肢體癱瘓,站立不穩,提尾時(shí)向一側轉圈為模型成功的判斷標準。

  神經(jīng)功能缺失體征評分　參考Longa及Bederson的5分制法在動(dòng)物麻醉清醒后24h進(jìn)行評分。0分:無(wú)神經(jīng)損傷癥狀;1分:不能完全伸展對側前爪;2分:向對側轉圈;3分:向對側傾倒;4分:不能自發(fā)行走,意識喪失。分值越高,說(shuō)明動(dòng)物行為障礙越嚴重。

 

  （本文轉載丁香園）