實(shí)驗試劑：PBS(磷酸鹽緩沖液pH7.4)（實(shí)驗室常規配置）；非免疫山羊血清；Triton X-100（sigma）；BSA抗體稀釋液（實(shí)驗室常規配置）；A蛋白抗體（Santa cruz）；B蛋白抗體（Abcam）；Alexa Fluor? 488 donkey anti-goat IgG (H+L)(Invitrogen)；Alexa Fluor? 555 Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment(Invitrogen)

實(shí)驗儀器：激光共聚焦掃描顯微鏡(LeicaTCS-SP5型)

實(shí)驗步驟： 將細胞每孔2ml（密度為2*10⁶/L）傳至激光共聚焦專(zhuān)用培養皿；接種24h后，采用刺激物處理；25min后培養皿內細胞培養液，PBS沖洗3次，2-4%甲醛固定15min；1×PBS緩沖液（0.01M，pH7.4）洗滌3次，每次5min，滴加非免疫山羊血清（內含0.3%Triton X-100）封閉液,覆蓋液面2-3mm，室溫放置60min，除去多余液體；加A蛋白一抗50μL（1:100），4℃下過(guò)夜；PBS洗3次，每次5min，加熒光標記的A蛋白二抗 [Alexa Fluor? 488 donkey anti-goat IgG (H+L)] 50μL（1:200），室溫下放置60min；PBS沖洗3次，加B蛋白一抗50μL（1:500）37℃下放置1h，PBS洗3次，每次5min；加熒光標記的B蛋白二抗[(Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment)] 50μL（1:200），置于室溫下 60 min；PBS洗3次，每次5min；激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察、拍照，每組照相2張，用MOTIC FLUO1.0生物熒光分析處理軟件將圖片進(jìn)行量化 。 

實(shí)驗分組：刺激物分4組。培養液中刺激物的終濃度：刺激物L(fēng)0.5ng/ml；刺激物S20nM；刺激時(shí)間25分鐘
  1組：control（DMEM培養液）
  2組：刺激物L(fēng)
  3組：刺激物S 
  4組：刺激物L(fēng)+S

（本文轉載生物通）