構建以篩選基因新霉素（Neo）取代剔除基因的一個(gè)或多個(gè)外顯子的質(zhì)粒，轉入ES細胞，獲得正確發(fā)生同源重組的ES克隆。ES細胞進(jìn)行囊胚注射，獲得部分ES來(lái)源的嵌合鼠，嵌合鼠與野生型小鼠交配，最終獲得來(lái)源于重組ES細胞的雜合子小鼠。雜合子小鼠一條染色體上的靶基因exon被Neo基因所取代，雜合子交配獲得目的基因失活的純合子小鼠。