常說(shuō)的過(guò)柱子應該叫柱層析分離， 也叫柱色譜。 我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱。由于柱分的經(jīng)驗成分太多，就關(guān)于色譜柱的使用，小代搜集了一下資料，希望對您能有所幫助。

     一、柱子可以分為：加壓，常壓，減壓 

     壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì )減低柱子的塔板數。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率最高的，但是時(shí)間也最長(cháng)，比如，天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。
     減壓柱能夠減少硅膠的使用量， 感覺(jué)能夠節省一半甚至更多，但是，由于大量的空氣通過(guò)硅膠會(huì )使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(cháng)）。以前曾經(jīng)大量的過(guò)減壓柱，對它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒(méi)動(dòng)過(guò)減壓的念頭了。
     加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類(lèi)似，只不過(guò)外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚(yú)缸供氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過(guò)大，不然溶劑走的太快就會(huì )減低分離效果。個(gè)人覺(jué)得加壓柱在普通的有機化合物的分離中是比較適用的。

     二、關(guān)于柱子的尺寸，應該是又粗又長(cháng)的最好

     柱子長(cháng)了，相應的塔板數就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^?。?，這樣相對的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有 0.5 厘米，那么各組分就比較容易得到完全分離了。當然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過(guò)這些成本相對于產(chǎn)品來(lái)說(shuō)也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說(shuō)，不過(guò)溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費）。
     現在見(jiàn)到的柱子徑高比一般在 1：5~10，書(shū)中寫(xiě)硅膠量是樣品量的 30～40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開(kāi)（是指在所需組分 rf 在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1 以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如，200 毫克的樣品，用50px×500px的柱子）；如果，相差不到 0.1，就要加大柱子，我覺(jué)得可以增加柱子的直徑，比如，用 75px 的，也可以減小淋洗劑的極性等等關(guān)于無(wú)水無(wú)氧柱，適用于對氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品。
     可以濕柱，也可以干柱。不過(guò)在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因為，溶劑和硅膠飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過(guò)。也是因為分離的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循 schlenk 操作。


     三、關(guān)于濕法、干法上樣 
 
     濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等。。。但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒(méi)關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì )析出，這一般都是比較大量的樣品才會(huì )出現，是因為硅膠對樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì )發(fā)生，這就應該先重結晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結晶那就不管它了，直接過(guò)就是了，樣品隨著(zhù)淋洗劑流動(dòng)會(huì )溶解的。
有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如，DMF，DMSO 等，會(huì )隨著(zhù)溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長(cháng)的脫尾），這時(shí)就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說(shuō)法是 1：1，我覺(jué)得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說(shuō)明有的樣品沒(méi)有吸附在硅膠上）。


     四、溶劑的選擇 
 
     當然是最便宜，最安全，最環(huán)保的了，所以，大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻中有寫(xiě)用正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過(guò)，因為極性很小，有時(shí)還是非它不可。乙醚也可以用，但是，就是容易睡覺(jué)，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。
     二氯甲烷也有用的，但是，要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過(guò)程，所以，夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì )在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì )好一些。甲醇，據說(shuō)能溶解部分的硅膠，所以，產(chǎn)品如果想過(guò)元素分析的話(huà)要留神，應該經(jīng)過(guò)后繼處理，比如，重結晶等。其他溶劑用的相對較少，要依個(gè)人的不同需要選擇。
     由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用 10 升或 25 升的塑料桶裝的， 就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。 經(jīng)常能夠從送來(lái)的大桶底部看見(jiàn)有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了， 所以在比較嚴格的柱分時(shí)就要對溶劑重蒸。 當然，過(guò)原料時(shí)就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。
     另外，溶劑在過(guò)柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節省部分經(jīng)費，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過(guò)柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì )導致極性的變化，一般會(huì )使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適，正好極性越來(lái)越大了。在過(guò)完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓，因為在減壓旋蒸時(shí)會(huì )有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來(lái)， 常壓時(shí)就會(huì )減少這種現象，如果雜質(zhì)和你下面要過(guò)的樣品有反應那就慘了。


     五、關(guān)于操作問(wèn)題  

     1.裝柱：
     柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑，會(huì )被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節門(mén)的。干法和濕法裝柱覺(jué)得沒(méi)什么區別，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會(huì )從一側斜著(zhù)下來(lái)）。書(shū)中寫(xiě)的都是不能見(jiàn)到氣泡，我覺(jué)得在大多數情況下有些小氣泡沒(méi)太大的影響，一加壓氣泡就全下來(lái)了。當然如果你裝的柱子總是有氣泡就說(shuō)明需要多練習了。但是柱子更忌諱的是開(kāi)裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì )影響分離效果，甚至作廢！

     2.加樣：
     用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開(kāi)，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑，然后，再打開(kāi)活塞，如此，兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開(kāi)始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～100px 就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如，二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。

     3.淋洗劑的選擇：
     感覺(jué)上要使所需點(diǎn)在 Rf0.2~0.3 左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開(kāi)，過(guò)柱子就用那種極性，如果 Rf 在 0.6，即使相差 0.2 也不容易在柱子上分開(kāi)，因為柱子是一個(gè)多次爬板的狀態(tài)。
     可以通過(guò)公式的比較：
     0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。

     4.樣品的收集：
     用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡，所以，如果樣品與硅膠的吸附比較強的話(huà)，就不容易流出。這樣就會(huì )發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相。
     另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了三個(gè)樣品。嗚嗚，如果都用小試管那工作量又太大。

     5.最后的處理：
     柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì )累積到產(chǎn)品中，所以，如果想送分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因為，大部分雜質(zhì)溶在溶劑里，一洗基本就沒(méi)了，必要時(shí)進(jìn)行重結晶。

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