一、簡(jiǎn)述
     良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結果的基礎和前提。由于免疫組化染色過(guò)程中存在很多步驟或環(huán)節，每一個(gè)步驟或環(huán)節都可能影響到染色的最終結果，因此，要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技術(shù)員和病理醫生密切配合、相互協(xié)調、共同努力才能保證做出合格的免疫組化切片。雖然免疫組化染色可以存在各種各樣的問(wèn)題，但從染色的結果看，一般可分為兩類(lèi)：第一類(lèi)為無(wú)色片（即無(wú)陽(yáng)性信號）。

     二、無(wú)色片
     染色結束后，切片中見(jiàn)不到任何陽(yáng)性信號。這是常規工作中比較常見(jiàn)的現象，出現這種現象，有兩種可能：

     1、真陰性結果：整個(gè)染色過(guò)程沒(méi)有出現問(wèn)題，組織或細胞確實(shí)不表達與抗體相關(guān)的抗原。
     2、假陰性結果：即此陰性結果不是真實(shí)的反映。假陰性結果又可分為兩種情況：（1）、切片中根本就不包含所預期檢查的組織或細胞。出現這種情況，要麼是病理醫生選擇錯了切片或抗體選錯了，要麼是技術(shù)員選錯了蠟塊。獲得正確的切片進(jìn)行染色是獲得正確結果的前提。由此表明：制作出合格的免疫組化切片不僅僅是技術(shù)員的事，病理醫生也起著(zhù)不可缺少的作用。

   （2）、染色過(guò)程中的某一或某些環(huán)節出了問(wèn)題。比如，組織未進(jìn)行抗原修復，有的組織必須經(jīng)過(guò)抗原修復才能檢測抗原表達；或選用了只能用于冰凍組織而不能用于石蠟包埋組織的抗體；或一抗失效，雖然抗體失效在理論上是一個(gè)逐漸的過(guò)程，但偶爾也遇到突然失效的情況，抗體長(cháng)期不用和/或已超過(guò)有效期是主要的原因。也可見(jiàn)于染色過(guò)程中漏掉了某一環(huán)節，如忘記加二抗或三抗，或用了兩次二抗而缺少了三抗，或配制DAB時(shí)少了過(guò)氧化氫。

     為了避免這種簡(jiǎn)單的錯誤，有一種簡(jiǎn)單的方法：在三抗孵育結束時(shí)，將切片上的三抗甩在一張白紙上，在將配制好的DAB滴一滴在白紙的三抗上，觀(guān)察是否出現棕色。如果出現了，證明三抗和DAB的配制過(guò)程沒(méi)有錯誤。如果這種DAB再滴到切片上沒(méi)有出現任何陽(yáng)性信號，問(wèn)題一定是出在三抗以前。如果紙上不出現棕色反應，問(wèn)題肯定在三抗DAB或DAB的配制過(guò)程。這種簡(jiǎn)單方法能迅速的幫助我們查找出現問(wèn)題可能的原因。
           
                                                            （免疫組化實(shí)拍圖）

     三、如何解決陰性染色問(wèn)題？
     解決陰性染色的問(wèn)題非常簡(jiǎn)單，就是設立“陽(yáng)性對照”。如果陽(yáng)性對照有了表達，說(shuō)明染色的全過(guò)程和所有試劑都沒(méi)有問(wèn)題。如果此時(shí)測試片仍為陰性，便是真實(shí)的陰性，說(shuō)明組織或細胞沒(méi)有相應的抗原表達。反之，如果陽(yáng)性對照沒(méi)有著(zhù)色，表明染色過(guò)程中某個(gè)或某些步驟出了問(wèn)題或試劑出了問(wèn)題。應一一尋找原因。

     陽(yáng)性對照包括兩種，一種稱(chēng)為“自身對照”或“內部對照”，這是指在測試的切片中本身就存在已知的抗原，如正常淋巴結中存在T和B細胞抗原，CD20或CD3都應該有表達。自身對照是一種比較理想的對照，對照和測試組織或細胞都在同一張切片中，都處于相同的試驗條件下，結果更可靠也更具有可比性。在選擇自身對照片時(shí)最好選擇既有病變組織同時(shí)又有正常組織的部分，這樣有利于對比。另一種稱(chēng)為“外部對照”，有時(shí)在測試的切片中不存在已知的抗原，如在胃的標本中懷疑是惡性黑色素瘤，需要用HMB45或Mart-1來(lái)檢測，在正常的胃組織中本身不存在相關(guān)的抗原，如果病變出現陽(yáng)性反應結果，尚能提示是惡黑，但是如果出現陰性結果，就無(wú)法確定是本身組織中不含黑色素瘤抗原，還是技術(shù)問(wèn)題。

     因此，應另外設立一個(gè)已知的陽(yáng)性對照。這種在測試組織之外的陽(yáng)性對照稱(chēng)為“外部對照”。在實(shí)際工作中需要設立外部對照的情況很多，如果每一種抗體都要選不同的陽(yáng)性對照，工作量會(huì )很大。為了解決這個(gè)問(wèn)題，目前國內外有單位將多種不同組織集成在一起，制成多組織切片、“臘腸”“春卷”切片、組織芯片等，其連續切片儲備待用，需要時(shí)取出一張便可作為陽(yáng)性對照。另外，比較簡(jiǎn)單的方法，是采用闌尾作為陽(yáng)性對照，因為與人體其它組織器官比較闌尾包含的組織種類(lèi)較多，如有上皮、淋巴組織、平滑肌、間質(zhì)、神經(jīng)、血管、間皮等。一張闌尾切片可以檢測大多數常用的抗體。

     設立陽(yáng)性對照是病理醫生的任務(wù)或責任，而不是技術(shù)員的責任。病理醫生觀(guān)察了HE切片，了解切片中是否有自身對照，如果沒(méi)有，就應告訴技術(shù)員采用陽(yáng)性對照。因此，病理醫生在免疫組化中的作用是不可忽視的。