目的:建立一種可以得到高純度肺微血管內皮細胞的分離方法,并分別觀(guān)察野生型小鼠及晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)敲除小鼠細胞在脂多糖(LPS)刺激下細胞骨架F-actin變化情況。
方法:取6~8周齡野生型C57小鼠及RAGE 基因敲除小鼠的肺,經(jīng)I型膠原酶消化后,尼龍細胞篩過(guò)濾,然后采用免疫磁珠法分離原代小鼠肺微血管內皮細胞(PMVEC),經(jīng)形態(tài)學(xué)及免疫熒光法鑒定后,以L(fǎng)PS(1 mg/L)刺激不同時(shí)間后用激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察細胞骨架F-actin的變化情況。
結果:鏡下可見(jiàn)原代培養的PMVECs 呈梭形或多角形,經(jīng)細胞抗Ⅷ因子相關(guān)抗原(ⅧF-Ag)染色鑒定純度高,LPS刺激后野生型小鼠PMVEC骨架重排,形成應力纖維,而RAGE 敲除小鼠PMVEC 骨架破壞不明顯。
結論:采用免疫磁珠法可以獲得高純度的小鼠肺微血管內皮細胞,且RAGE參與了LPS介導的小鼠肺微血管內皮細胞骨架破壞。