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熒光定量PCR與半定量PCR檢測獼猴不同器官組織中黃嘌呤脫氫酶/氧化酶基因的mRNA表達差異的比較

  目的 :比較熒光定量PCR與半定量PCR檢測獼猴體內肝臟組織、上皮組織、睪丸組織、心肌組織,腎臟組織中黃嘌呤脫氫酶氧化酶(XDH/XO)的mRNA的相對表達量的差異,為改進(jìn)實(shí)驗研究方法學(xué)提供參考依據。

  方法 :提取健康獼猴新鮮肝臟組織、上皮組織、睪丸組織、心肌組織,腎臟組織中總RNA,使用相同的引物序列及內參基因,分別用熒光定量PCR與半定量PCR進(jìn)行相對定量檢測,結果做比對分析。

  結果 :兩種檢測方法均能檢測到健康獼猴新鮮肝臟組織、上皮組織、睪丸組織、心肌組織,腎臟組織中XDH/XO的mRNA表達,熒光定量PCR靈敏度可檢測到肝臟組織0.4ng總RNA中的XDH/XO的mRNA表達,半定量PCR靈敏度可檢測到肝臟組織15.625 ng總RNA中的XDH/XO的mRNA表達,熒光定量PCR較半定量靈敏度高39倍。兩種方法檢測結果均顯示獼猴不同組織XDH/XO的mRNA表達在肝臟組織中表達水平最高,對于表達量較低的其他組織,熒光定量PCR與半定量PCR檢測結果存在有一定差異。

  結論: 兩種方法均可用于檢測獼猴體內肝臟組織、上皮組織、睪丸組織、心肌組織,腎臟組織中黃嘌呤氧化脫氫酶(XDH/XO)的mRNA的相對表達量,熒光實(shí)時(shí)定量PCR靈敏度較高于半定量PCR法。

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