目的:觀(guān)察成纖維細胞生長(cháng)因子-2/聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸/骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(FGF-2/PELA/BMP-2)微囊支架對SD大鼠骨膜來(lái)源干細胞成骨分化作用。
方法:提取SD大鼠骨膜來(lái)源干細胞(PDSC),進(jìn)行流式細胞學(xué)表面標記物鑒定及成骨、成軟 骨、成脂三系誘導并進(jìn)行茜素紅、甲苯胺藍、阿利新藍、油紅O染色及免疫熒光實(shí)驗。制備FGF-2/PELA/BMP-2、FGF-2/PELA、 PELA/BMP-2、PELA四組材料,進(jìn)行掃描電鏡(SEM)觀(guān)察微囊表面,通過(guò)ELISA實(shí)驗制作兩因子的控釋曲線(xiàn)。將4組材料浸提 液與第3代骨膜來(lái)源干細胞進(jìn)行共培養,分別在7、14 d進(jìn)行堿性磷酸酶(AKP)活性檢測,分別在7、14、21 d進(jìn)行qRT-PCR成骨 基因表達檢測,觀(guān)察比較各組PDSC成骨分化能力,數據匯總后進(jìn)行統計學(xué)分析。
結果:流式細胞學(xué)表面標記物鑒定顯示PDSC 表達間充質(zhì)干細胞表面標記物,三系誘導分化染色結果表面PDSC具有成骨、成軟骨、成脂等多向分化能力。AKP活性結果顯 示,FGF-2/PELA/BMP-2組在PDSC培養的7 d及14 d,AKP活性最高,差異顯著(zhù)。FGF-2/PELA/BMP-2組的qRT-PCR結果提示 RunX-2、OCN表達量均高于其他組,且在第14天RunX-2表達量達到頂峰,OCN呈持續增長(cháng)趨勢。
結論:FGF-2/PELA/BMP-2 仿生控釋微囊支架中的細胞因子活性得以保留,并相對其他實(shí)驗組具有更高的促進(jìn)PDSC成骨分化的能力。