1.同種免疫性抗腎小球腎炎

　　(1)復制方法  體重180～200g SD大鼠，造模前先測定其24h尿蛋白總量，并采血測血清Cr、BUN濃度。經(jīng)大鼠腹腔注射預先制備的同種大鼠腎皮質(zhì)加弗氏完全佐劑乳液(體重為150～180g SD大鼠，按30mg/kg劑量經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，常規消毒腹部皮膚并去毛，沿腹中線(xiàn)作正中切口，無(wú)菌手術(shù)操作進(jìn)腹，暴露腎臟，用絲線(xiàn)結扎腎動(dòng)脈，自結扎處向腎臟插管，剪斷腎靜脈，經(jīng)插管用生理鹽水反復沖洗腎臟至白色，切除腎臟，取腎皮質(zhì)用電動(dòng)勻漿器在冰浴中磨成勻漿，分裝后密封于-10℃冷凍保存。每次臨用時(shí)取皮質(zhì)勻漿25g，加弗氏完全佐劑至50ml，吸乳缽中研勻，緩緩加入生理鹽水100ml邊加邊研磨，使乳化完全均勻)，每次2ml/只，每周注射1次(造模14周共注射7次)，于造模8周開(kāi)始每?jì)芍芡ㄊ占蛞?，進(jìn)行24h尿蛋白定量，并稱(chēng)體重以調整注射腎皮質(zhì)的量。造模14周時(shí)除收集模型動(dòng)物尿液測24h尿蛋白量外，采血作血清Cr、BUN、ALB、 Hb與T-CHO測定。取腎臟組織作透射電鏡標本，電鏡下觀(guān)察。

　　(2)模型特點(diǎn)  模型大鼠注射。腎皮質(zhì)加弗氏完全佐劑后第8周，其24h尿蛋白量已明顯升高，隨注射次數增加呈進(jìn)行性升高，至14周(注射7次后)時(shí)，24h尿蛋白量可升至造模前的12倍左右。模型大鼠全血黏度(高、中、低切變率)，血漿黏度及血漿蛋白原含量均顯著(zhù)增高；14周時(shí)模型大鼠Hb下降，血清ALB下降，T-CHO增高，血清Cr與 BUN無(wú)明顯變化。電鏡下超微結構觀(guān)察模型大鼠腎小球毛細血管GBM不規則增厚變寬，有的扭曲。在GBM內或 GBM靠足細胞側有較多成團或條帶狀電子致密物沉積，足細胞損傷明顯，排列紊亂，足突融合，增寬，裂孔膜消失，嚴重區有斷裂溶解，毛細血管內皮細胞腫脹，管璧不規則。

　　(3)比較醫學(xué)  采用本方法制備的大鼠同種免疫性抗腎小球基膜腎炎，其致病機制是基于當動(dòng)物受到自體抗腎抗體或自體抗原抗體復合物刺激后，可引起機體腎小球基膜產(chǎn)生免疫反應，造成腎臟組織內腎小球基膜出現免疫損傷，最終形成腎炎。模型制作過(guò)程中由于大鼠是主動(dòng)免疫，主動(dòng)地產(chǎn)生抗腎組織抗體，故又可將此類(lèi)腎炎稱(chēng)之為主動(dòng)型海曼(Heymann)腎炎(active Heymann nephritis, AHN)。目前已報道的主動(dòng)型海曼腎炎模型較多，且都具有模型病變穩定，造模周期短，具有廣泛的實(shí)用性等特點(diǎn)。但在造模用的同種動(dòng)物抗原物質(zhì)制備，抗原注射劑量、注射時(shí)間及次數則略有差異。

　　2.異種免疫性抗腎小球基底膜腎炎

　　(1)復制方法  取體重為300～350g成年SD大鼠，按3ml/kg體重的劑量10％水合氯醛麻醉。采用常規無(wú)菌冷生理鹽水經(jīng)腹主動(dòng)脈灌注腎臟至無(wú)血，摘取腎臟，剝離腎皮質(zhì)，加入少量生理鹽水于勻漿器內制備勻漿。將等量勻漿與弗氏完全佐劑充分混勻后制成油包水乳劑，給體重3kg左右新西蘭兔，通過(guò)足蹠－腘窩淋巴結－耳緣靜脈混合免疫法免疫兔，效價(jià)達1：32以上時(shí)，頸動(dòng)脈插管放血，提取抗近曲腎小管刷狀緣微絨毛(BBM)抗血清，分裝后低溫凍存備用。取體重200g左右SD大鼠，經(jīng)其尾靜脈一次性注入兔抗BBM抗血清，劑量為0.6ml/100g體重，初次免疫后第4、5、6、7周末分別經(jīng)腹腔注入抗血清0.5ml以加強免疫。大鼠在初次免疫預定時(shí)間內，測定24h尿蛋白量，并采血分離血清后檢測血清白蛋白(ALB)、肌酐、膽固醇(CHO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平；同時(shí)取大鼠腎組織標本制作常規組織切片和透射電鏡切片，進(jìn)行光鏡、電鏡、免疫熒光觀(guān)察。

　　(2)模型特點(diǎn)  首次免疫后第1周末，模型大鼠24h尿蛋白量即明顯升高，第3周末仍可維持較高水平；第4周末加強免疫后，模型大鼠24h尿蛋白含量上升更為明顯，直至第8周末達高峰。初次免疫后第1、3、6、8周末，模型大鼠血清ALB水平均明顯下降；血清CHO水平在第3、6、8周末明顯升高。實(shí)驗范圍內兩組大鼠血清肌酐水平無(wú)明顯差異。初次免疫后第l周末，模型大鼠血清SOD水平即開(kāi)始降低，并呈逐漸下降趨勢，但至第8周末則有所回升，但仍明顯低于正常動(dòng)物；從首次免疫后第1周開(kāi)始至第8周末，模型動(dòng)物血清MDA水平明顯升高。免疫后模型大鼠血清肌酐水平無(wú)明顯變化。光鏡觀(guān)察結果顯示。免疫早期模型大鼠腎組織形態(tài)學(xué)改變不明顯，第8周末時(shí)，腎組織HE染色切片顯示，腎小球體積增大、毛細血管基底膜(GBM)彌漫性增厚；馬森(Masson)染色可見(jiàn)GBM外側有較多細顆粒狀嗜復紅蛋白免疫復合物沉積。免疫熒光觀(guān)察結果顯示，第8周末，模型大鼠羊抗兔IgG、兔抗大鼠IgG和羊抗大鼠C3沿腎小球 GBM呈顆粒狀分布，熒光強度均為強陽(yáng)性。透射電鏡觀(guān)察顯示，第1周末，模型大鼠腎小球GBM局灶性輕度增厚，腎小球臟層上皮細胞下基底膜外側可見(jiàn)少量電子致密物沉積；至第8周末，腎小球GBM呈彌漫性不規則增厚，大塊電子致密沉積處可見(jiàn)足突融合。

　　(3)比較醫學(xué)  臨床上原發(fā)性膜性腎病是成人腎病綜合征的主要病理類(lèi)型，有關(guān)其組織損傷及進(jìn)展機制目前仍未闡明。海曼(Heymann)腎炎模型作為研究人類(lèi)膜性腎病的經(jīng)典動(dòng)物模型，應用較為廣泛。本模型屬于異種免疫性抗腎小球基膜腎炎，其造模機制是，用甲種動(dòng)物的。腎皮質(zhì)勻漿免疫乙種動(dòng)物，使后者產(chǎn)生抗甲種動(dòng)物的抗腎血清(抗腎抗體)，然后再將抗腎血清注射健康的甲種動(dòng)物，誘發(fā)其產(chǎn)生腎炎。由于這種腎炎模型的建立是通過(guò)被動(dòng)地注射抗體，所以又可稱(chēng)為被動(dòng)型海曼腎炎(Passive Heymann Nephritis,  PHN)。PHN是研究產(chǎn)生蛋白尿腎臟損害較理想的動(dòng)物模型，因為腎臟是模型動(dòng)物損害的惟一靶器官，所用的抗體很少，且病變出現較快，病理改變特征與人類(lèi)膜性腎病相似，也與AHN相同。以往研究報道，通常采用一次性靜脈注入抗 BBM抗血清的方法建立PHN模型，雖然模型發(fā)病迅速，但由于其病程短、病情易緩解，不能滿(mǎn)足長(cháng)期觀(guān)察的需要。本模型在一次性尾靜脈注射兔抗鼠BBM抗血清的基礎上，采用腹腔多次小劑量注射抗血清加強免疫的方法，成功建立了大鼠PHN模型，模型動(dòng)物表現出大量蛋白尿、低蛋白血癥和高脂血癥為特征的腎病綜合征，病理表現為腎小球GBM彌漫性增厚，GBM外側免疫復合物沉積和足突融合。模型動(dòng)物24h尿蛋白量持續升高和腎臟病理?yè)p害的漸進(jìn)性特征表明，多次加強免疫可以維持并加重腎損害。本模型可用于動(dòng)態(tài)觀(guān)察模型動(dòng)物的腎損害、PHN的發(fā)病機制及人類(lèi)膜性腎病的藥物治療方面的研究。