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雙螢光素酶報告基因檢測 (miRNA靶基因驗證)實(shí)驗


螢光素酶是理想的報告基因,因為哺乳動(dòng)物細胞中不含內源性螢光素酶,一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單報告基因實(shí)驗往往會(huì )受到各種實(shí)驗條件的影響,而雙報告基因則通過(guò)共轉染的對照作為內參為試驗提供一基準線(xiàn),從而可以在最大程度上減小細胞活性和轉染效率等外在因素對實(shí)驗的影響,使得數據結果更為可信。Dual-Luciferase雙螢光素酶報告基因檢測系統在細胞中同時(shí)表達螢火蟲(chóng)螢光素酶和海腎螢光素酶,兩者沒(méi)有種源同源性并對應不同的反應底物,故而沒(méi)有交叉干擾。得益于超強的光信號和超高的信噪比,本系統被廣泛用于miRNA靶基因驗證。  


由于miRNA主要通過(guò)作用于靶基因的3’UTR起作用,可以將目的基因3’UTR區域構建至載體中報告基因luciferase的后面, 通過(guò)比較過(guò)表達或者干擾miRNA后,報告基因表達的改變(監測螢光素酶的活性變化)可以定量反映miRNA對目的基因的抑制作用;結合定點(diǎn)突變等方法進(jìn)一步確定miRNA與靶基因3’UTR的作用位點(diǎn)。

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