1.shRNA序列設計與合成

 （1）客戶(hù)提供干擾序列；

 （2）針對目的基因中洪代為設計并合成三對特異性的siRNA序列，根據siRNA序列設計對應莖環(huán)結構的shRNA序列，然后合成三對shRNA序列（結果中保證其中一條干擾效率不低于70%）。

2.shRNA慢病毒載體構建

 將三個(gè)shRNA分別克隆入慢病毒載體，構建shRNA干擾慢病毒載體，并進(jìn)行測序鑒定構建成功。

二、目的基因干擾慢病毒載體的包裝和濃縮

 1.慢病毒載體的大量包裝

   大量擴增效率三組shRNA慢病毒載體和慢病毒的輔助質(zhì)粒，將三個(gè)質(zhì)粒按一定比例大量轉染293T細胞，進(jìn)行慢病毒顆粒的大量包裝。

 2. 慢病毒的濃縮

   包裝48小時(shí)后收集病毒，并對病毒進(jìn)行體外大比例濃縮，得到有效滴度為10^8PFU/ml的慢病毒顆粒