一、免疫組化操作流程（PAP法、ABC法）
1. 脫蠟至水：二甲苯（1）、（2）脫蠟各15min→無(wú)水乙醇（1）、（2）各5min→90%乙醇5min→水洗→PBS5min
2. 抗原修復：1）微波修復：微波中高檔5min 3次→自然冷卻至室溫→PBS過(guò)一遍3次?min，
2）酶消化：0.1%胰蛋白酶37℃孵育30min→ PBS5min
3. 阻斷內源性過(guò)氧化物酶：置3% 3次?雙氧水浸泡15min →PBS5min
4. 封閉：10%正常二抗血清室溫10min
5. 一抗孵育：甩去血清后加一抗，置濕盒內4℃過(guò)夜→PBS5min 3次?3次?
6. 二抗孵育：擦片后加二抗，置濕盒內37℃孵育30min→PBS5min
二、免疫組化操作：
1. 4%多聚甲醛常規灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中過(guò)夜。蠟塊制作。切片，貼片。0.01MKPBS清洗5min×3后；
2. 加入配好的0.3%的過(guò)氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%過(guò)氧化氫）30min，以消除內源性過(guò)氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3；
3. 加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml）30min，以增加細胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；
4. 加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋疊氮納0.08g）稀釋的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗體，0.01MKPBS洗5min×3；
5. 加入0.01MKPBS稀釋的的二抗，室溫孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3；
6. 加入ABC復合物之類(lèi)的抗體，室溫孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸餾水迅速沖三次；
7. 加入顯色液，進(jìn)行免疫組織化學(xué)顯色，時(shí)間一般不超過(guò)30min，可不時(shí)在顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，待細胞著(zhù)色而背底顏色較淡時(shí)馬上吸去顯色液，用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MKPBS終止反應；
8. 梯度酒精脫水之后，封片，拍照。
