產(chǎn)品介紹 

      慢病毒（Lentivirus）載體是以 HIV-1 （人類(lèi)免疫缺陷1型病毒）為基礎發(fā)展起來(lái)的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、長(cháng)期穩定表達外源基因等優(yōu)點(diǎn)，因此成為導入外源基因的有力工具?，F在慢病毒系統已經(jīng)被廣泛應用到各種細胞系的基因過(guò)表達、RNA干擾、microRNA研究以及活體動(dòng)物實(shí)驗中。
 
     中洪博元生物提供慢病毒載體構建、RNAi(shRNA)、miRNA、過(guò)表達和干擾慢病毒包裝以及基于慢病毒技術(shù)的穩定細胞系構建服務(wù)。

     中洪博元公司的慢病毒產(chǎn)品主要為第四代質(zhì)粒系統，其特點(diǎn)為高表達，高滴度，快速克隆和易檢測。慢病毒滴度可達到1E+8 TU/mL，不必濃縮和純化，就能感染目的細胞并且通過(guò)GFP發(fā)出的綠色熒光來(lái)篩選，可以不同實(shí)驗者的實(shí)驗需求，使后續的實(shí)驗更加方便快捷。

整體實(shí)驗流程

（一） 實(shí)驗流程（1、2、3為并列步驟）
 
      1. 慢病毒過(guò)表達質(zhì)粒載體的構建 設計上下游特異性擴增引物，同時(shí)引入酶切位點(diǎn)，采用PCR技術(shù)(采用高保真KOD酶，3K內突變率為0%)從模板中（cDNA質(zhì)?；蛘呶膸欤┱{取目的基因CDS區（coding sequence）連入T載體。將CDS區從T載體上切下，裝入慢病毒過(guò)表達質(zhì)粒載體。
 
     2. 慢病毒干擾質(zhì)粒載體的構建 合成siRNA對應的DNA頸環(huán)結構，退火后連入慢病毒干擾質(zhì)粒載體。
 
     3. miRNA載體構建從 Genomic 中調取基因相應的Mir 前體, 并在調取引物中引入酶切位點(diǎn)。
 
     4. 慢病毒載體的包裝與濃縮純化 制備慢病毒穿梭質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒（兩質(zhì)粒包裝系統），三種質(zhì)粒載體分別進(jìn)行高純度無(wú)內毒素抽提，共轉染293T細胞，轉染后6 h 更換為完全培養基，培養48和72h后，分別收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，病毒上清液通過(guò)超離心濃縮病毒。