蛋白互作研究技術(shù)
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發(fā)布時(shí)間：2017-10-23
熒光能量共振轉移 （FRET）
檢測活體中生物大分子納米級距離和納米級距離變化的有力工具，廣泛應用于生物大分子相互作用分析、細胞生理研究、免疫分析等。
原理
當供體熒光分子的發(fā)射光譜與受體熒光分子的吸收光譜重疊，并且兩個(gè)分子的距離在 10nm 范圍以?xún)葧r(shí)，就會(huì )發(fā)生一種非放射性的能量轉移，即 FRET 現象，使得供體的熒光強度比它單獨存在時(shí)要低的多（熒光猝滅），而受體發(fā)射的熒光卻大大增強（敏化熒光）。
應用
1、生物大分子結構和功能研究：細胞膜受體之間相互作用、細胞內分子之間相互作用、膜蛋白的定位修飾、檢測酶活性變化等
2、核酸雜交分析
3、免疫分析：不僅適用于小分子 （如半抗原），而且適用于大分子 （如蛋白質(zhì)）。
特點(diǎn)
1、實(shí)驗背影低，但抗原、抗體純度要求較高；
2、簡(jiǎn)便的均相檢測（不需要洗板），操作簡(jiǎn)單；
3、實(shí)驗產(chǎn)物比較穩定，可用于固相分析或利用特殊的熒光顯微鏡進(jìn)行單細胞分析，但需要特殊的輔助設備；4、應用靈活多樣檢測組合豐富，需要融合蛋白的表達5、可用于復雜環(huán)境下的分析，研究活細胞生理條件下研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間相互作用。
6、有效的作為 1.0～10.0nm 距離范圍。
（本文轉載丁香通）
