RNA提取前須知
1、操作中戴口罩和手套
2、清潔無(wú)塵環(huán)境中操作,試驗臺、移液器要用75%乙醇擦拭消毒,也可使用RNase抑制劑,操作時(shí)避免大聲喧嘩和頻繁走動(dòng)。
3、玻璃器皿常規洗滌后,應用0.1%焦磷酸二乙酯(DEPC)浸泡處理,然后再用滅菌雙蒸水漂洗幾次,高壓滅菌去除DEPC,160℃烘烤4h。
4、移液器槍頭和離心管要經(jīng)DEPC處理水處理、高壓滅菌后使用。
5、提取后的總RNA定量后部分用于反轉錄,剩余RNA樣品標記并用封口膜封口后-80℃可保存數月。
6、配置0.1%DEPC處理水 DEPC是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑,常用濃度為0.1%。1L配方:DEPC 1ml,蒸餾水 1L,搖床過(guò)夜,高壓滅菌30min。