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細胞凋亡技術(shù)背景二

細胞凋亡技術(shù)背景二

細胞凋亡的檢測方法主要包括以下幾種:?細胞徑HE、吖啶橙(AO)、Hoechst33342、Hoechst33258染色,利用光境或熒光顯微鏡對細胞形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行觀(guān)測。其中Hoechst33342/PI雙標記法是檢測細胞凋亡的常規方法。PI是一種核酸染料,它不能透過(guò)完整的細胞膜,由于壞死細胞的膜透性發(fā)生改變,則能被PI染色。Hoechst33342是能能夠與DNA特異結合的具有良好膜通透性的熒光染料,正常細胞、壞死細胞及凋亡細胞的DNA均可被Hoechst33342染色,當細胞經(jīng)Hoechst33342/PI雙染色后,壞死細胞呈PI強陽(yáng)性染色(紅色),而凋亡細胞或正常細胞呈PI低染,利用熒光顯微鏡技術(shù)結合凋亡細胞核形態(tài)的變化就可以將壞死細胞、凋亡細胞和正常細胞區分開(kāi)來(lái)。?利用DNA凝膠電泳及DNA片段原位標記法(TURNEL assay)檢測凋亡細胞DNA的斷裂。?利用流式細胞儀檢測亞G1期細胞的比例或利用Annexin V、PI聯(lián)合標記法檢測細胞膜磷脂酰絲氨酸翻轉,正?;罴毎鸄nnexin V、PI均低染;凋亡細胞Annexin V高染、PI低染;壞死細胞PI高染。

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