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動(dòng)物細胞轉染背景二

動(dòng)物細胞轉染背景二:

       本實(shí)驗采用帶有綠色熒光蛋白極影的質(zhì)粒,利用脂質(zhì)體轉染人的腫瘤細胞系。綠色熒光蛋白(GFP)來(lái)源于海洋生物水木,近年來(lái)在生物化學(xué)和細胞生物學(xué)中成為最廣泛應用的標記性蛋白質(zhì)之一。隨著(zhù)對極影表達的調控,蛋白質(zhì)在活細胞中自然狀態(tài)下的變化等重要問(wèn)題研究的深入,迫切需要一種操作方便、不用加外源底物就能在活細胞中檢測的分子探針。GFP就能滿(mǎn)足這些要求,,在分子生物學(xué)中有廣泛的應用前景。GFP cDNA從水母中分離得到,是在研究水木的發(fā)光機制是發(fā)現的。鈣離子和腔腸素于水母發(fā)光蛋白結合后,水母發(fā)光蛋白發(fā)藍色熒光,同時(shí)激發(fā)GFP,使其發(fā)綠色熒光。GFP基因汗3個(gè)外顯子,長(cháng)2.6kb。GEP是由238個(gè)氨基酸所組成的單體蛋白,其性質(zhì)十分穩定。GFP在不加任何外源物質(zhì)的情況下,經(jīng)紫外光或藍光激發(fā)后即可產(chǎn)生綠色熒光,且熒光性質(zhì)穩定。GFP基因與目的基因相連接,不影響目的基因的表達且能較好的標識出目的基因產(chǎn)物的位置。目前,GFP的應用已非常廣泛。

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