實(shí)驗步驟:
1、先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著(zhù),均勻得劃橫線(xiàn),大約 每隔1cm一道,橫穿過(guò)孔。每孔至少穿過(guò)5條線(xiàn)。
2、在空中加入約5×105個(gè)細胞,具體數量因細胞不同而不同,掌握為過(guò)夜能鋪滿(mǎn)。
3、第二天用槍頭比著(zhù)直尺,盡量垂至于背后的橫線(xiàn)劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜。
4、用PBS洗細胞3次,去處劃下的細胞,加入無(wú)血清培養基。
5、放入37度5% CO2培養箱中培養。按0,6,12,24小時(shí)取出,拍照 (具體時(shí)間依實(shí)驗需要而定)。
6、統計方法:使用Image J軟件打開(kāi)圖片后,隨機劃取6至8條水平線(xiàn),計算細胞間距離的均值。
7、數據處理:每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的距離長(cháng)度-0h距離=每個(gè)時(shí)間長(cháng)度細胞整體遷移的距離,求出均數和標準差,時(shí)間為橫軸,遷移距離為縱軸(mm)作圖,并比較初始0h與實(shí)驗結束時(shí)試驗組與對照組的照片。