目的：在真核細胞中表達人Wnt7b基因并且觀(guān)察對大鼠原代軟骨細胞的退變作用。

　　方法：取出生24 h SD大鼠關(guān)節處軟骨，Ⅱ型膠原酶多次消化后獲得原代軟骨細胞，取P1 代細胞進(jìn)行實(shí)驗。擴增人Wnt7b 基因及克隆至PCDH-GFP 上，轉染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b 至293ft 細胞中，48 h 后收集細胞上清及轉染細胞，Western blot 鑒定Wnt7b 在293ft 細胞中的表達。收集的上清分別稀釋10倍和50倍培養大鼠軟骨細胞，24 h后觀(guān)察細胞形態(tài)并收集細胞蛋白和抽提RNA，Western blot和定量PCR檢測軟骨退變指標MMP13、MMP3、Ⅱ型膠原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表達。

　　結果：成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP載體上且在293ft細胞中得到有效表達。含Wnt7b培養基干預軟骨細胞24 h后，軟骨細胞形態(tài)由原來(lái)的多角形變成長(cháng)梭形，Wnt7b處理組軟骨細胞MMP13和MMP3表達顯著(zhù)上調，Ⅱ型膠原的表達下調。PCR結果表明A-can和Sox9表達下降，ColⅩ和ADAMTS5表達增強。

　　結論：有效在真核細胞中表達Wnt7b基因并且促進(jìn)大鼠軟骨細胞退變，建立軟骨細胞退變的體外模型。