目的: 建立一種評價(jià)芍藥苷對大鼠背根神經(jīng)節神經(jīng)元細胞內游離Ca2+濃度影響的方法.
方法: 顯微解剖獲取大鼠背根神經(jīng)節(DRG),通過(guò)胰蛋白酶消化,過(guò)篩,用DF-12和抗有絲分裂培養液交替培養純化,獲得原代大鼠DRG神經(jīng)元細胞,并采用細胞免疫熒光技術(shù)測定DRG神經(jīng)元細胞純度;采用激光共聚焦顯微成像技術(shù),觀(guān)察細胞內Ca2+熒光強度的變化,并對Ca2+熒光強度變化率進(jìn)行分析,探討芍藥苷對DRG細胞內游離鈣離子濃度及辣椒素受體的影響.
結果: 采用上述方法分離得到的DRG細胞純度可高達95%以上,辣椒平可通過(guò)阻斷辣椒素激活的瞬時(shí)受體電位通道的作用而抑制細胞內Ca2+的增加.芍藥苷表現出與辣椒平類(lèi)似的作用,可以阻斷細胞外Ca2+內流.
結論: 芍藥苷可能是通過(guò)作用于TRPV1通道,而抑制DRG細胞內Ca2+大量增加,本方法可以用于評價(jià)藥物對大鼠DRG細胞內Ca2+濃度的影響.