目的 觀(guān)察大鼠胚胎期注射綠色熒光蛋白(GFP)標記的人臍帶間充質(zhì)干細胞(GFP-hUCMSCs)在 SD 大鼠肝中存活和肝分化,探索在胚胎發(fā)育期建立人-大鼠嵌合體肝的可行性。
方法 運用攜帶綠色熒光蛋白的 慢病毒轉染標記人臍帶間充質(zhì)干細胞,然后注射到實(shí)驗組大鼠胚胎。胎鼠出生后,制作冰凍切片觀(guān)察 GFP- hUCMSCs 在肝組織的遷移和分布,同時(shí)免疫組織化學(xué)法檢測人相關(guān)蛋白在鼠肝內的表達。對照組注射等體積生理 鹽水。
結果 實(shí)驗組胎鼠出生 45d、75d、120d 的肝組織內檢測到 GFP 信號的分布,對應肝組織內可檢測到人肝 細胞相關(guān)蛋白 ALB、HNF3β 和HNF4α 的表達,但 120d大鼠含量極少、部分甚至檢測不到。對照組為陰性。
結論 胚胎期注射 hUCMSCs 的胎鼠出生 75d 的肝內仍可檢測到 GFP 信號的存在和人肝細胞相關(guān)蛋白 ALB、HNF3β 和HNF4α 的表達,且隨時(shí)間延長(cháng)而呈現逐漸減少的趨勢。