目的:觀(guān)察大鼠雪旺細胞系RSC96 細胞條件培養液(RSC96-CM)對少突膠質(zhì)前體細胞(OPCs)增殖的影響,探討其作用機制。
方法:應用免疫粘附法從胚胎15d 的SD 大鼠脊髓分離OPCs,應用BrdU 摻入實(shí)驗檢測OPCs的增殖,應用RT-PCR 技術(shù)檢測PDGF-AA和bFGF 在RSC96 細胞的表達,應用ELISA 技術(shù)檢測RSC96-CM 中PDGF-AA和bFGF 蛋白的濃度,以特異性抑制劑阻斷觀(guān)察PDGF-AA和bFGF 在RSC96-CM誘導OPCs 增殖中的作用,以特異性抑制劑觀(guān)察ERK和JNK信號 途徑在RSC96-CM誘導OPCs增殖中的作用。
結果:不同濃度的RSC96-CM培養的OPCs,其BrdU+細胞的比例與對照組相 比均顯著(zhù)增加(P<0.05),其中,在含50% RSC96-CM 的培養液中培養的OPCs 的BrdU+細胞的比例達高峰。RT-PCR 證實(shí) RSC96 細胞顯著(zhù)表達PDGF-AA和bFGF 的mRNAs,ELISA 結果發(fā)現,RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF 的蛋白濃度分別是 我們前期報道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87 倍和0.92 倍。PDGFR的特異性抑制劑AG1295 和bFGFR 特異性抑制劑PD173074 均顯著(zhù)降低RSC96-CM 誘導的OPCs 增殖;此外,Erk1/2 特異性抑制劑U0126 和JNK 特異性抑制 SP600125的預孵也顯著(zhù)降低RSC96-CM誘導的BrdU+ OPCs的比例(P<0.01)。
結論:RSC96-CM顯著(zhù)誘導OPCs的增殖,其通 過(guò)RSC96分泌的PDGF-AA和bFGF激活Erk1/2和JNK信號途徑而發(fā)揮作用;RSC96-CM也可以作為OPCs常規培養的擴增劑。