目的： 構建慢病毒介導的NogginRNAi干擾序列,并分析這些干擾序列對Noggin基因的沉默效果.

　　方法： 針對目的基因Noggin的mRNA設計四條干擾序列,并將這些序列連接到Lenti-KD慢病毒載體,將重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉染HEK-293T包裝細胞,獲得重組慢病毒.將重組病毒感染MC3T3-E1細胞,利用puromycin進(jìn)行篩選,獲得穩定表達細胞系.通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot技術(shù)分析不同干擾序列的干擾效果.

　　結果： 實(shí)時(shí)熒光定量PCR結果顯示,四種干擾序列對Noggin基因的表達都有一定的沉默效果,但只有shNoggin-1(P<0.01)對其表達影響顯著(zhù).Western blot結果顯示,四種干擾序列中只有shNoggin-1(P<0.01)對Noggin的表達蛋白具有顯著(zhù)的降低作用.

　　結論： 獲得了一種Noggin基因的干擾序列,該序列能夠干擾Noggin基因mRNA的穩定性,從而影響蛋白的表達.該干擾序列可以用于部分敲除Noggin基因,從而用于研究Noggin基因的功能.