目的:通過(guò)建立樹(shù)鼩腺病毒TaqMan 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測方法,快速準確地檢測樹(shù)鼩腺病毒。
方法:根據TAV 全基因組3’端保守序列設計合成特異性引物;用含目的基因片段的重組質(zhì)粒作為標準品進(jìn)行標準曲線(xiàn)繪制,建立TAV TaqMan 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測方法。
結果:建立的TAV 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測方法特異性好,與樹(shù)鼩源及其他物種常見(jiàn)病毒無(wú)交叉反應;方法的最低檢測限度為每微升3.7 拷貝,靈敏性強;相關(guān)檢測系數R2 為0.998,擴增效率為95.7%;擴增結果具有良好的線(xiàn)性關(guān)系,且重復性檢測效果好。
結論:成功建立了TAV TaqMan 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測方法,靈敏度高,重復性好,可用于TAV 感染的早期快速檢測。