目的: 建立一種高純度的肺泡巨噬細胞分離培養方法,為研究巨噬細胞生物學(xué)特性,開(kāi)展細胞內寄生菌存活機理研究提供材料。
方法: 在無(wú)菌環(huán)境下以PBS多次灌洗山羊肺臟,收集細胞后,用外周血單核細胞分離液結合密度梯度離心法從混合細胞中分離出羊肺泡巨噬細胞;培養于含10%胎牛血清的細胞培養基中,倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞形態(tài),并利用其對雞紅細胞的吞噬功能檢測細胞活性;采用流式細胞術(shù)檢測單核巨噬細胞表面特征性標志CD14。
結果: 獲得的貼壁細胞具典型的巨噬細胞形態(tài)學(xué)特征,有偽足和突起伸出,呈現圓形及不規則形狀,胞漿豐富,胞體較大;培養的巨噬細胞54.5%吞噬了雞紅細胞,具有較強的吞噬活性;在體外連續培養近一個(gè)月,仍有93.7%的細胞能特異性表達CD14抗原,具有巨噬細胞特異性免疫表型。
結論: 本研究獲得的山羊肺泡巨噬細胞純度高、生物活性好,為開(kāi)展細胞內寄生菌的疾病機理研究提供了細胞模型。