2014 年7月，央視日前報道了湖南、湖北、安徽、福建等4省存在轉基因大米的新聞，引發(fā)社會(huì )極大關(guān)注。記者在武漢市一家大型超市，隨機購買(mǎi)5種大米。經(jīng)檢測后發(fā)現，這5種大米中，有3 種含轉基因成分：Bt63。Bt63 是一種抗蟲(chóng)害的基因，它是蘇云金芽孢桿菌基因中的殺蟲(chóng)晶體蛋白基因，可以有效防止鱗翅目等多種有害昆蟲(chóng)。
近年來(lái)轉基因事件層出不窮，時(shí)有耳聞。那什么是轉基因呢？轉基因技術(shù)是提取特定生物體基因組中所需要的目的基因或者人工合成指定序列的DNA 片段，將該基因片段轉入特定生物中，與其本身的基因組進(jìn)行重組，獲得具有穩定表現特定的遺傳性狀的個(gè)體。農作物轉基因通常是為了獲得抗病毒、抗蟲(chóng)、抗寒、抗旱、抗澇、抗鹽堿、抗除草劑等特性。
中國目前并未批準轉基因水稻的商業(yè)化生產(chǎn)。歐盟委員會(huì )決議：中國大米產(chǎn)品必須憑不含轉基因Bt63大米成分的證書(shū)才能進(jìn)入歐盟市場(chǎng)。其解釋為：“轉基因作物只有經(jīng)過(guò)全面科學(xué)的評估和批準，才能允許投放入歐洲市場(chǎng)?！边@一決定目的在于防止未被批準的轉基因Bt63大米被歐洲消費者購買(mǎi)和食用?？梢?jiàn)大米中Bt基因的鑒別十分關(guān)鍵。檢測大米中Bt基因有較多方法，RephiLe以《農業(yè)部953 號公告-6-2007_轉基因植物及其產(chǎn)品成分檢測抗蟲(chóng)轉Bt 基因水稻定性PCR 方法》為基礎，推出大米Bt 基因檢測解決方案，具體如下：
一、實(shí)驗原理
根據轉基因大米特異性序列設計引物，對試樣進(jìn)行PCR 擴增。對PCR 結果進(jìn)行檢測，確定是否含有轉基因片段。
二、儀器和試劑
PCR 儀MyCycler (biorad,USA)
臺式微量冷凍離心機Microfuge 22R （BeckmanCounter ,USA）
凝膠成像系統Gel DocTM XR（biorad,USA）
紫外檢測儀NanoDrop1000 (eppendorf,German)
核酸電泳儀EPS100 (上海天能)
超純水儀Direct-Pure UP（RephiLe）
恒溫水浴HH.S.21.8 (上海躍進(jìn)醫療器械廠(chǎng))
三、試驗方法
1、試樣預處理
將大米粉碎，制成待測樣品。
2、基因組提取
使用Axygen 基因組DNA 小量試劑盒，按照其所述方法提取，UV 檢測含量。
3、引物設計
待測基因 引物設計
SPS SPS-F1: TTGCGCCTGAACGGATAT
SPS-R1: GGAGAAGCACTGGACGAGG
Bt Bt-F1: GAAGGTTTGAGCAATCTCTAC
Bt-R1: CGATCAGCCTAGTAAGGTCGT
4、PCR 條件
反應體系：使用DBI 2xTaq PCR Master Mix，按照說(shuō)明，加入模板及引物。
反應條件：第一階段95 ℃變性5 min；第二階段35 次循環(huán)：94 ℃變性1 min，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸30s）；第三階段72 ℃延伸7 min。
5、核酸檢測
對PCR 產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳。SPS 擴增產(chǎn)物大小277 bp，Bt 擴增產(chǎn)物大小301 bp。
6、結果確認
采用含Bt 基因的質(zhì)粒作為陽(yáng)性對照，確認不含Bt 基因的水稻做印性對照。陽(yáng)性對照SPS與Bt 基因都擴增出來(lái)，陰性對照只擴增出SPS 基因。
待測樣本如擴增出SPS 基因，表明含水稻成份。
如擴增出SPS 基因和Bt 基因，表明含轉基因水稻成份。
普通PCR 實(shí)驗只能確定樣本中是否含轉基因成份。需要確認轉基因水稻含量可以通過(guò)Realtime PCR 實(shí)驗。
PCR 實(shí)驗對于實(shí)驗用水的要求非常高，水中的污染物會(huì )造成不同的損害：金屬離子特別是Mg 等會(huì )影響Taq酶的活性。有機物特別是腐殖酸和棕黃酸，會(huì )與DNA 締合或者干擾酶，并影響熒光信號；DNA酶會(huì )降解DNA。細菌在代謝的過(guò)程中會(huì )釋放離子和有機物，產(chǎn)生各種干擾。因此，PCR 實(shí)驗中必須使用無(wú)離子，無(wú)有機物，無(wú)細菌的超純水。
為保證PCR實(shí)驗的準確性，生命科學(xué)實(shí)驗室都會(huì )配備高質(zhì)量的超純水儀來(lái)進(jìn)行實(shí)驗，例如，中國科學(xué)院上海營(yíng)養所、湖南農業(yè)大學(xué)袁隆平實(shí)驗室等國內知名生物實(shí)驗室使用的是RephiLeDirect-Pure UP 超純水儀。Direct-Pure UP 超純水儀以自來(lái)水為進(jìn)水，生產(chǎn)RO純水和超純水。它采用兩組大容量的雙管純化柱，有效去除水中的痕量金屬離子，產(chǎn)水電阻率可達到18.2MΩ?cm。內部超純水定時(shí)循環(huán)，配合雙波長(cháng)紫外燈可以降低水中的有機物水平至5 ppb以下。終端特別配置超濾除熱原柱，可以有效去除細菌和熱原等生物大分子物質(zhì)。Direct-Pure UP 超純水儀適合包含PCR在內的分子生物學(xué)實(shí)驗使用。RO 純水可以用于洗滌實(shí)驗器皿，超純水可以配置電泳Buffer，做空白對照等。
