中洪博元生物    細胞轉染促銷(xiāo)進(jìn)行中. . .

      慢病毒（Lentivirus）載體是以HIV-1為基礎發(fā)展起來(lái)的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力，較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產(chǎn)生表達shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達shRNA，實(shí)現在多種類(lèi)型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定的基因表達的功能性沉默，為在原代的人和動(dòng)物細胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產(chǎn)生特定基因表達降低的動(dòng)物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者，不但具備特異性地使基因表達沉默的能力，而且充分發(fā)揮了慢病毒載體自身所具備的優(yōu)勢，為基因功能的研究提供了更強有力的工具。

二．簡(jiǎn)要步驟：

1、慢病毒轉染貼壁細胞實(shí)驗方法 
  （1）慢病毒轉染前18-24h，將貼壁細胞以1×105個(gè)/ml鋪到6孔板中。使細胞在慢病毒轉染時(shí)的數量為2×105個(gè)/ml左右。 
  （2）次日，用含有6 μg/ml polybrene的1ml新鮮培養基替換原培養基，加入適量病毒懸液。37℃孵育。
  （3）（對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟）8h-16h后，觀(guān)察轉染情況，更換新鮮培養基1ml/孔，37℃培養。
  （4）如果慢病毒含有熒光蛋白，一般轉染48小時(shí)后可見(jiàn)明顯熒光表達，72小時(shí)后更加明顯。如需FACS檢測轉染效率，可在轉染后72-96小時(shí)進(jìn)行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加藥篩選，可以在轉染3-4天后開(kāi)始加藥。

2、慢病毒轉染懸浮細胞實(shí)驗方法  
  （1）在2×105個(gè)/ml懸浮細胞中加入polybrene至6 μg/ml和適量病毒，充分混勻。37℃孵育。 如果該細胞株不易受慢病毒感染，可以使用離心孵化的方法。即在細胞培養板上加入病毒感染液后在離心機上以2500rpm(1000-1500g)在32℃或者室溫下離心90min。
  （2）（對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟）8h-16h后，觀(guān)察轉染情況，更換新鮮培養基1ml/孔（6孔板），37℃培養。 
  （3）繼續培養1-3天。中間視細胞生長(cháng)情況可傳代或換液。