2 間接法又稱(chēng)為熒光抗-抗體法

j 需要兩種抗體參與，即一抗和二抗(熒光素標記)。一抗對標本中的抗原來(lái)說(shuō)起抗體的作用，但對熒光標記的二抗來(lái)說(shuō)又起著(zhù)抗原作用。

–  可用來(lái)檢測標本中未知抗原，也可檢測血清中未知抗體。

k間接免疫熒光法操作步驟

?  標本的處理及非特異染色的封閉同直接法；

?  一抗染色：

–  加未標記的特異性抗體(通常1:100稀釋?zhuān)?/span>0.01MpH7.4的PBS稀釋)，37°C作用30min或4°C過(guò)夜。

?  0.01M PBST漂洗5min×3次(震蕩漂洗)；

?   加熒光標記的二抗抗體，37°C濕盒避光作用30min。

?  0.01M PBST避光漂洗5min×3次(例如包上錫紙，在搖床上漂洗)；

?  甘油緩沖液封片

?  鏡檢

?  優(yōu)點(diǎn)：敏感性較高，比直接法高10倍左右；制備一種熒光標記抗體，可應用于多種一抗；

?  缺點(diǎn)：是參加反應的因子較多，產(chǎn)生非特異性染色的機會(huì )增多。