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Giemsa染色方法的標準操作

一、Giemsa染色


1.根據需要量,取8ml雙蒸水,加入姬姆薩原液1ml,再加入姬姆薩稀釋液1ml,再加入姬姆薩稀釋液1ml,混勻即為工作液,此工作液常溫可保存兩周。


2、按常規方法將石蠟切片脫蠟水化,PBS清洗。


3、將切片放到染色架上,滴加2-3滴染色工作液,使覆蓋全部組織,室溫染色15-30分鐘。


4、用自來(lái)水緩慢從玻片一端沖洗,晾干后鏡檢。


二.HE染色


1. 脫蠟復水: 石蠟切片經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟各5min,然后放入100%、95%、90%、80%、70%各級酒精溶液中各3-5min,再放入蒸餾水中3min。


2.染色:切片放入蘇木精中染色約10-30min。


3.水洗:用自來(lái)水流水沖洗約15min。使切片顏色變藍(或放入堿性水中也可),但要注意流水不能過(guò)大,以防切片脫落。


4.分化:將切片放入1%鹽酸乙醇液中褪色,約2秒至數十秒鐘。見(jiàn)切片變紅,顏色較淺即可。


5.漂洗:切片再放入自來(lái)水流水中使其恢復藍色。


6.脫水Ⅰ:切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3-5min。


7、復染:用0.5%伊紅乙醇液對比染色1-3min。


8.脫水Ⅱ:將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色,然后放入無(wú)水乙醇中3-5min。最后用吸水紙吸干多余的乙醇。


9.透明:切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3-5min。


10.封藏:中性樹(shù)膠封存


三、固綠-番紅O染色


1.常規脫蠟至水


2.入新鮮配制的Weigert染液染色5min.


3.酸性乙醇分化液分化15s。


4.蒸餾水洗1min。


5.在固綠染色液內浸染5min,蒸餾水洗1min。


6.入Safranin O stain內浸染2min,蒸餾水洗1min。


7.用乙酸溶液洗滌切片1min,以便去除殘留的固綠,蒸餾水洗1min。


8.分別用95%乙醇、無(wú)水乙醇脫水。


9.二甲苯透明,光學(xué)樹(shù)脂封固。

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