HE染色全名為蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理學(xué)染色技術(shù)。

一張質(zhì)上乘的HE切片是病理醫生得以做出正確診斷的關(guān)鍵。HE染色是目前國內外病理診斷上廣泛采用的 常規染色方法。專(zhuān)家們曾指出：“一張好的HE切片是保證正確病理診斷的關(guān)鍵” 。切片質(zhì)量的好壞，可直接影響疾病診斷的及時(shí)與準確性。作為一個(gè)合格的實(shí)驗狗，能制作出一張高質(zhì)量的HE染色切片，是必須掌握的技術(shù)之一。

實(shí)驗原理

一、細胞核染色原理：

蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著(zhù)色。細胞核內染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

二、細胞漿染色原理：

細胞漿內主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系，當pH調到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7-5.0時(shí)，胞漿對外不顯電性，此時(shí)酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時(shí)，大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pH值，表現酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現時(shí)胞核也被染色，核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點(diǎn)以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽(yáng)離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽(yáng)離子）結合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。

三、分化作用：

染色后，用某些特定的溶液將組織過(guò)多結合的染色劑脫去，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為分化作用，所用的溶液稱(chēng)為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木精的醌型結構，使組織與色素分離而褪色。經(jīng)蘇木精染色后，必須用0.5%鹽酸乙醇分化，使細胞核過(guò)多結合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去，在進(jìn)行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此，在HE染色中分化是極為關(guān)鍵的一步。

四、返藍作用：

分化之后，蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色，在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài)，呈藍色。組織切片經(jīng)0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而終止分化，再用弱堿性水（0.2%氨水）使蘇木精染上的細胞核呈現藍色，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為返藍作用或藍化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時(shí)間較長(cháng)。

實(shí)驗材料

固定液：常用95%乙醇和冰丙酮

蘇木精染液：稱(chēng)取蘇木精粉0.5g，銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均勻，濾紙過(guò)濾，備用。

伊紅染液：稱(chēng)取0.5g水溶性伊紅染液，溶于100ml蒸餾水中。

稀鹽酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%鹽酸。

系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹(shù)膠。

培養瓶、培養皿、眼科鑷、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。

實(shí)驗步驟

樣品制備：對于貼壁生長(cháng)細胞，胰酶消化，調整細胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養相應時(shí)間后，取出細胞爬片，用PBS 洗滌3次。

樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。

染核：蘇木素染液染色2-3min，自來(lái)水洗滌。

分色：鏡下觀(guān)察，若細胞核染色過(guò)深，用1%鹽酸酒精溶液分色數秒，自來(lái)水洗滌。

染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來(lái)水洗滌。

吹干或自然晾干細胞 爬片后，中性樹(shù)膠封片。

若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時(shí)間相應延長(cháng)，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。

實(shí)驗結果及注意事項

實(shí)驗結果：細胞核呈藍色，細胞質(zhì)，肌纖維，膠原纖維和紅細胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和細菌可呈藍色或紫藍色

注意事項：

1.染色時(shí)調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(cháng)，組織酸化而影響細胞核著(zhù)色。因此，要在自來(lái)水中沖洗時(shí)間長(cháng)一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著(zhù)色較深。染伊紅時(shí)胞漿著(zhù)色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。 

2.切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應在顯微鏡下控制進(jìn)行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質(zhì)基本無(wú)色為佳。如果過(guò)分延長(cháng)分色時(shí)間將導致染色太淺，應重新染色后再行分色。 

3.切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時(shí)可出現白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹底，應將切片退回無(wú)水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。 

4.在染色過(guò)程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經(jīng)元形態(tài)。 

5.切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前，切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。 

6.  最后封固時(shí)，要用中性樹(shù)脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會(huì )褪色，所用樹(shù)脂濃度要適當，樹(shù)脂封固時(shí)不能有氣泡。