一、CCK8檢測細胞增殖/毒性的原理
Cell Counting Kit-8(簡(jiǎn)稱(chēng)cck-8)試劑可用于簡(jiǎn)便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細胞增殖和毒性分析。
用途:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗
CCK8的優(yōu)點(diǎn):
-
使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;
-
CCK-8法能快速檢測;
-
CCK-8法的檢測靈敏度很高,甚至可以測定較低細胞密度;
-
CCK-8法的重復性?xún)?yōu)于MTT 法;
-
CCK-8法對細胞毒性??;
-
CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,毋需預制,即開(kāi)即用。
CCK8的缺點(diǎn):
-
與MTT法相 比,CCK8和XTT的價(jià)格比較貴。
-
CCK8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養基顏色接近,不注意的話(huà)容易產(chǎn)生漏加或多加。
與以往的增殖/毒性測定試劑相比較:
檢測方法
|
MTT法
|
XTT法
|
WST-1法
|
CCK8法
|
甲臢產(chǎn)物的水溶性
|
差(需加有機溶劑溶解)
|
好
|
好
|
好
|
產(chǎn)品性狀
|
粉末
|
2瓶溶液
|
溶液
|
1瓶溶液
|
使用方法
|
配成溶液后使用
|
現配現用
|
即開(kāi)即用
|
即開(kāi)即用
|
檢測靈敏度
|
高
|
很高
|
很高
|
高
|
檢測時(shí)間
|
較長(cháng)
|
較短
|
較短
|
最短
|
檢測波長(cháng)
|
560-600nm
|
420-480nm
|
420-480nm
|
430-490nm
|
細胞毒性
|
高,細胞形態(tài)完全消失
|
很低,細胞形態(tài)不變
|
很低,細胞形態(tài)不變
|
很低,細胞形態(tài)不變
|
試劑穩定性
|
一般
|
較差
|
一般
|
很好
|
批量樣品檢測
|
可以
|
非常適合
|
非常適合
|
非常適合
|
便捷程度
|
一般
|
便捷
|
便捷
|
非常便捷
|
|