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CCK-8(WST-8)

       CCK-8是近年新開(kāi)發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測,原理與WST-1類(lèi)似:在電子載體1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯鹽(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞線(xiàn)粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan)。生成的甲臜物的數量與活細胞的數量成正比,用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數量,在一定細胞數量范圍內甲臜形成的量與細胞數成正比。

實(shí)驗方法:

       在96孔板中接種細胞懸液(100 μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(37℃,5% CO2)。細胞經(jīng)處理后。向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì )影響OD值的讀數)。將培養板在培養箱內孵育1~4小時(shí)。用酶標儀測定在450nm處的吸光度。若暫時(shí)不測定OD值,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl溶液或者1%w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內測定,吸光度不會(huì )發(fā)生變化。

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