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活力染色


   一、實(shí)驗原理


   各種細胞操作,包括傳代、凍存和原代組織的分離,均能導致細胞死亡。為了確定群體細胞中的存活細胞數,可采用臺盼藍染料排斥實(shí)驗(Phillips 1973)。正常的健康細胞能排斥染料,但細胞膜完整性喪失后臺盼藍可彌散入細胞內。染料排斥實(shí)驗是一種粗糙的估計細胞活力的方法,無(wú)法區別 10%~20% 的活力差異。除此之外,排斥染料的細胞有可能不貼壁或不能較長(cháng)時(shí)問(wèn)生存或繁殖。

   二、實(shí)驗方法


   1) 胰蛋白酶處理細胞(見(jiàn)上文“胰蛋白酶處理分離細胞”),無(wú)菌狀態(tài)下取 0.5 ml 細胞用 PBS 稀釋至每毫升 2X105~4X105。

   2) 向另一管中無(wú)菌加人 0.5 ml 上述細胞稀釋液,并加人 0.5 ml 臺盼藍溶液 (0.4%)

   3) 細胞在染料中停留時(shí)間為不短于 3 分鐘、不超過(guò) 10 分鐘, 用毛細吸管取含染料的細胞懸液,靠毛吸作用使其進(jìn)入計數器內。

   4) 至少計數總數 500 個(gè)細胞,藍色細胞單獨計數。記錄不排斥染料的藍色細胞的出現頻度。

   5) 根據不排斥染料的細胞數計數細胞的活力百分比。

   例如:?jiǎn)螌蛹毎鹊鞍酌柑幚砗笾貞矣?5 ml 培養液中, 取 0.5 ml 細胞與 4.5 ml PBS 混勻,吸取 0.5 ml 懸浮于 PBS 中的細胞加于另一小管中,再加人 0.5 ml 臺盼藍溶液混勻。上述懸液加于計數器上,共計數 540 個(gè)細胞,62 個(gè)細胞不排斥染料呈藍色,活性百分比為 88.5%。


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