1.   試驗準備：200 ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。

2.   棄掉培養皿中的培養基，用1 ml的PBS溶液洗滌兩次。

3.  用Tip頭加入1 ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕拍培養瓶壁，觀(guān)察到細胞完全從壁上脫落下來(lái)為止。

4.   加入1 ml的含血清培養基終止反應。

5.   用Tip頭多次吹吸，使細胞完全分散開(kāi)。

6.  將培養液裝入離心管中，1 000 rpm離心5 min。

7.   用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇0.8X106個(gè)細胞加入一個(gè)35mm培養皿。

8.  將合適體積完全培養液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養皿中，使其均勻分布。

9.  將培養皿轉入CO2培養箱中培養，第二天轉染。

二、細胞轉染

1.  轉染試劑的準備

（1）將400 ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。

（2）震蕩后將試劑放在-20℃保存，使用前還需震蕩。

2.   選擇合適的混合比例（1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量）來(lái)轉染細胞。在一個(gè)轉染管中加入合適體積的無(wú)血清培養基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。

3.  將混合液在室溫放置10-15分鐘。

4.  吸去培養板中的培養基，用PBS或者無(wú)血清培養基清洗一次。

5.  加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個(gè)小時(shí)。

6.  到時(shí)后，根據細胞種類(lèi)決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24-48小時(shí)。

三、第二次細胞傳代

1.   在轉染后24小時(shí)，觀(guān)察實(shí)驗結果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。

2.   再次進(jìn)行細胞傳代，按照免疫染色合適的密度0.8X105個(gè)細胞/35 mm培養皿將細胞重新粉入培養皿中。

3.   在正常條件下培養24小時(shí)后按照染色要求條件固定。

4.  轉染條件優(yōu)化可以參考TransFast的使用說(shuō)明書(shū)。