實(shí)驗方法原理
將小鼠的肝細胞從機體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長(cháng)和繁殖。
實(shí)驗材料
小鼠
試劑、試劑盒
DMEM無(wú)血清DMEM培養基胰酶PBS
儀器、耗材 飯盒紗布剪子鑷子燒杯平皿研磨玻片濾網(wǎng)離心管6孔培養板吸管移液管手套微量加樣器
實(shí)驗步驟
一、實(shí)驗材料準備
1. 動(dòng)物：小鼠。
2. 試劑：DMEM(含血清)、無(wú)血清DMEM培養基、胰酶、PBS。
3. 器械：飯盒、紗布、小剪子、小鑷子、大鑷子、大燒杯、平皿、研磨玻片、濾網(wǎng)、離心管(15/50 ml)、6孔培養板、吸管、移液管、手套、微量加樣器。
4. 準備：酒精擦拭臺面后把物品擺放好，開(kāi)紫外線(xiàn)燈照30分鐘后開(kāi)鼓風(fēng)機吹至實(shí)驗結束。
二、方法
1. 將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。
2. 剔除脂肪、結締組織、血液等雜物，轉移到另一個(gè)盛有PBS液的平皿中。
3. 用手術(shù)剪將臟器剪成小塊(大小約1mm2)，玻片研磨，轉到離心管，離心(1 000 rpm，5 min)。
4. 視組織或細胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
5. 加入3-5 ml含血清的培養液以中止胰酶消化作用。
6. 用100目孔徑濾網(wǎng)濾過(guò)，除去未消化的大組織塊。
7. 再次離心5 min，棄上清液。
8. 加入無(wú)血清培養液5 ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
9. 加入含血清的培養液1-2 ml(視細胞量)，血球計數板計數。
