1. 細胞經(jīng)甲基綠一呱咯寧混合液處理后,其中的 DNA 和 RNA 出現不同的呈色反應,一般認為這是由于帶有負電荷的核酸對堿性染料呱咯寧和甲基綠具有親和力,且這兩種染料的作用有選擇性,甲基綠染高聚分子的 DNA 呈藍綠色,呱咯寧染低聚分子的 RNA 呈紅色。由此對細胞中的 DNA 和 RNA 進(jìn)行定位、定性、和定量分析。
2. 由于不同的蛋白質(zhì)分子所帶的堿性和酸性基團的數目不同,在 pH 值不同的溶液中,蛋白質(zhì)分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下,整個(gè)蛋白質(zhì)所帶負電荷多,則為酸性蛋白質(zhì);帶正電荷多,則為堿性蛋白質(zhì)。據此,可將標本經(jīng)三氯醋酸處理提出核酸后,用不同 pH 值的固綠染液分別染色,細胞內的酸性蛋白和堿性蛋白質(zhì)顯示出來(lái)。
3. 過(guò)氧化物酶能把許多胺類(lèi)氧化為有色化合物,用聯(lián)苯胺處理標本,細胞內的過(guò)氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍色的聯(lián)苯胺藍,進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物,因而可以根據顏色反應來(lái)判定過(guò)氧化物酶的有無(wú)或多少。
4. 組織、細胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用 PAS 法來(lái)顯示,其化學(xué)基礎是利用過(guò)碘酸的氧化作用,打開(kāi)碳鏈形成醛,生成的醛基與 Schiff 試劑中的無(wú)色品紅反應形成紫紅色化合物。
PBS 緩沖液(pH7.2),甲基綠一呱咯寧醋酸緩沖液,純丙酮,l/2 丙酮 1/2 二甲苯,純二甲苯,70%乙醇,5%三氯醋酸,0.1%堿性固綠,0.1%酸性固綠,0.5%硫酸銅,聯(lián)苯胺混合液,1%番紅,無(wú)水乙醇,過(guò)碘酸酒精液,Schiff 氏酒精液,亞硫酸水,Ehrlieh,蘇木精,95%乙醇,Carnoy 固定液(甲醇:冰醋酸=3:1,體積比)
光學(xué)顯微鏡,解剖器材,蠟盤(pán),載玻片,吸水紙,染色缸,蓋玻片,水浴箱
蟾蜍、小白鼠各一只,肝臟石臘切片,培養的 Hela 細胞
1. Brachet 反應一顯示細胞內的 DNA 和 RNA
(1) 接種 Hela 細胞于蓋片上并培養 24~48 小時(shí),使長(cháng)成單層;(9) 鏡下觀(guān)察。
(7) 清水沖洗,蓋上蓋片鏡檢。
4. 過(guò)碘酸雪夫反應(PAS)——顯示細胞內糖原
(1) 取 l~2mm 厚的肝組織塊,用 Carnoy 氏液 4℃固定 4~6 小時(shí);