石蠟組織DNA的提取方法
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發(fā)布時(shí)間：2017-01-19
哺乳動(dòng)物DNA的分離通常是在有EDTA及SDS一類(lèi)的去污劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實(shí)現的。這一方法獲得的DNA，其大?。?00—150kb）適用于Southern分析和用λ噬菌體構建基因組DNA文庫。
石蠟塊切片10um/片×10，放入5ml離心管
↓加1ml二甲苯，37℃，5′（脫蠟）
4000rpm×15′
↓
小心吸去二甲苯
↓
重復上述步驟3次
↓
加入無(wú)水乙醇1ml，靜置5′
↓4000rpm×15′
吸去乙醇
↓
重復一次
↓
自然干燥
↓
加1mlPBS
↓
加入1ml DNA 抽提液
↓37℃，1小時(shí)
（200ug/ml）蛋白酶10-15ul
↓55℃，水浴，過(guò)夜
加入0.1 M Tris 平衡液（pH 8.0）2ml
↓12000rpm×15′
吸上清，加入酚/氯仿（1：1）混合液2ml
（氯仿為24：1的氯仿/異戊醇）
↓12000rpm×15′
吸上清，加氯仿2ml
↓12000rpm×15′
3M 醋酸鈉150ul，-20℃預冷無(wú)水乙醇3ml，顛倒數次
↓
離心，棄上清
↓
抽干
↓
100ul去離子水稀釋?zhuān)?20℃保存
試劑配制：
1. DNA抽提緩沖液配方
10 mM Tris?Cl (pH 8.0)
0.1M EDTA (pH 8.0)
配好滅菌后加
RNase 至 20ug/ml
0.5% SDS
