異丙醇  

   1. DNA不溶于異丙醇，加入異丙醇減少DNA溶解度，使得DNA析出。使得dna 和少量蛋白質(zhì)析出產(chǎn)生白色絮狀沉淀。降低分子運動(dòng)，易于形成沉淀。靜置時(shí)間越長(cháng)DNA得率越高 。溶液一成分：SNETSDS十二烷基磺酸鈉：可破壞細胞膜、核膜，并使組織蛋白與DNA分離

   NACL 調節鹽離子濃度

   EDTA 螯合金屬離子，抑制DNA酶

   Tris鹽酸 酸堿平衡

   溶液二：異丙醇溶液三：滅菌注射用水。（為什么在整個(gè)DNA提取過(guò)程中沉淀DNA需要冰冷的異丙醇或者乙醇？常溫的有什么樣的影響？因為低溫可以促進(jìn)DNA的沉淀，在DNA量很少的情況（比如你的實(shí)驗）可以提高抽提效率。不過(guò)如果DNA量較多時(shí)，常溫也沒(méi)問(wèn)題）

   1，樣本離心后粘液，雜質(zhì)多，用槍吸出部分溶液，盡量上清去干凈。

   2，  樣本中血液，雜質(zhì)較多時(shí)用細胞保存液，PBS，滅菌注射用水蒸餾水，清洗一遍。

   3，  煮沸時(shí)切勿讓管蓋爆開(kāi)，加熱裂解的時(shí)間可適當延長(cháng)到20分鐘。

   4，  加熱后，樣本離心10分鐘為佳。

   5，  加模板時(shí)，盡量將槍頭保持在液面靠上的位置。

   6，  血液，雜質(zhì)較多樣本加樣前可按5-10倍比例稀釋模板，在進(jìn)行擴增。

一步法提取DNA:

   特殊樣本用細胞保存液清洗一遍

   1,提取500UL樣本 （可適量減少 ）

   2. 14000RPM 離心7分鐘，去上清

   3.加入50UL 裂解液 震蕩混勻

   4.加熱17分鐘

   5.14000RPM離心7分鐘

   6.特殊樣本，模板稀釋5-10倍，再加樣

   1，  建議按人份混合酶和MIX混合液，剩余分開(kāi)保存。如混合好的試劑勿反復凍融，防止酶失活。

   2，  pcr管有無(wú)問(wèn)題，保存適當

   3，  擴增儀升降溫有無(wú)問(wèn)題，各孔間溫差，擴增程序。

   1，  變性時(shí)間，冰水溫度，PCR管內產(chǎn)物有無(wú)揮發(fā)，管底產(chǎn)物要浸入冰水至少2分鐘。

   2，  雜交時(shí)間適當延長(cháng)到15min

   3，  加樣用槍吹打幾次，使模板與雜交液混勻。