一、地高辛（Dig）標記DNA探針在石蠟切片上的檢測方法
1. 組織切片的預處理
（1）固定：組織以10%中性福爾馬林液，常規石蠟包埋，切片厚4-6 μm，最好用硅化玻，60℃烤片6-8 h。
（2）脫蠟至酒精。
（3）入0.2 mmol/L HCl 20 min 去除蛋白。
（4）50℃2×SSC，含5 mmol/L EDTA溶液中30 min。
（5）蛋白酶K（1 μg/ml 溶于0.1 mol/L PBS中），37℃20-25 min。
（6）0.2 mol/L 甘氨酸液：室溫10 min，中止蛋白酶反應。
（7）4%多聚甲醛（PBS新鮮配制），室溫20 min。
（8）PBS/5 mmol/L MgCl2漂洗10 min×2。
（9）脫水，從低濃度到高濃度至無(wú)水乙醇，空氣中干燥。
2. 預雜交
加預雜交液20 μl/每張切片，42℃水浴半小時(shí)（封閉非特異性雜交位點(diǎn)）。
3. 雜交
加雜交液20 μl/每張切片，加蓋硅化蓋片，將切片置于95℃10 min，使探針變性，DNA雙鏈解成單鏈，然后迅速置于冰上1 min，再將切片置于盛有2×SSC濕盒內，37-42℃過(guò)夜（16-18 h）。有條件也可用原位雜交儀進(jìn)行變性和雜交。
4. 雜交后漂洗
（1）2×SSC液內振動(dòng)移除蓋片。
（2）2×SSC55℃5 min×2。
（3）0.5×SSC50℃5 min×2。
（4）緩沖液Ⅱ（含0.5%封阻試劑，用緩沖液Ⅰ溶解）37℃30 min。
（5）緩沖液Ⅰ（100 mmol/L Tris-HCl，15.0 mmol/L NaCl pH7.5）15 min，室溫。
（6）酶標地高辛抗體（1∶5000，用緩沖液Ⅰ稀釋?zhuān)?7℃30 min。
（7）緩沖液Ⅰ15 min×2，室溫。
（8）緩沖液Ⅲ（100 mmol/L Tris-HCl，100 mmol/L NaCl，50 mmol/L MgCl2，pH9.5）室溫，2 min。
5. NBT/BCIP顯色，顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察。水洗，核固紅復染，脫水封片。
6. 結果
雜交陽(yáng)性信號呈紫蘭色，細胞核呈紅。（轉帖）
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