DNA純化實(shí)驗
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發(fā)布時(shí)間：2017-11-29
實(shí)驗方法原理
硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA，又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質(zhì)因為沒(méi)有與DNA相似的特性，所以被分離開(kāi)來(lái)。
實(shí)驗材料 PCR產(chǎn)物
試劑、試劑盒 PCR清潔試劑盒
儀器、耗材 96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板
實(shí)驗步驟
一、試劑盒組成、貯存、穩定性
1. 說(shuō)明書(shū)，耗材：96孔DNA制備板，96孔1.6 ml深孔板，96孔V型底板。
2. Buffer PCR-A：DNA結合溶液。室溫密閉貯存。若出現沉淀，應于65°C溫浴溶解并冷卻至室溫后再使用。
3. Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，根據瓶上指定的體積加入乙醇，混合均勻，室溫密閉貯存?？捎?00%乙醇或95%無(wú)水乙醇。
4. Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5。室溫密閉貯存。
二、操作步驟
用戶(hù)可以選擇負壓法或離心法。
A. 負壓法
1A. 正確連接負壓裝置，將96孔DNA制備板置于負壓裝置上；在PCR、酶切、酶標或測序反應液中，加3個(gè)體積的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混合均勻后轉移到96孔DNA制備板中，開(kāi)啟并調節負壓至-25-30英寸汞柱，緩慢吸掉板中溶液。
2A. 加0.3 ml Buffer W2，吸盡管中溶液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌兩次。
* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無(wú)水乙醇。
3A. 保持負壓將96孔DNA制備板抽吸10 min。
4A. 導流管朝下將96孔DNA制備板于長(cháng)纖維性紙巾上用力拍擊6次。
5A. 將96孔DNA制備板置于96孔V型底板上，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室溫靜置1 min?！? 000×g離心5 min洗脫DNA。
B. 離心法
1B. 在PCR、酶切、酶標或測序反應液中，加3個(gè)體積的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混勻后，轉移到96孔DNA制備板中，將96孔DNA制備板置于96孔1.6 ml深孔板中，1 000×g離心1 min，棄濾液。
2B. 在96孔DNA制備板中，加0.3 ml Buffer W2，1 000×g離心1 min，棄濾液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌一次。
* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無(wú)水乙醇。
3B. 將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中，≥3 000×g離心10 min。
4B. 將96孔DNA制備板置于潔凈的96孔V型底板中，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室溫靜置1 min?！? 000×g離心5 min洗脫DNA。
注意事項
1. 將洗脫液或水加熱至65°C，有利于提高洗脫效率。
2. DNA分子呈酸性，建議在2.5 mM Tris-HCl，pH8.5洗脫液中保存。（轉帖）
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