一、蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)－腓腸肌標本的制備

      1. 實(shí)驗原理　蛙或蟾蜍等兩棲類(lèi)動(dòng)物的一些基本生命活動(dòng)和生理功能與溫血動(dòng)物相似，而其離體組織生活條件易于掌握，在任氏液的浸潤下，神經(jīng)肌肉標本可較長(cháng)時(shí)間保持生理活性，因此，在生理學(xué)實(shí)驗中常用蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌離體標本來(lái)觀(guān)察神經(jīng)肌肉的興奮性、興奮過(guò)程以及骨骼肌收縮特點(diǎn)等。

      2. 實(shí)驗器材與藥品　蛙類(lèi)手術(shù)器械和藥品1套，包括：蛙板、小玻板各1塊，粗剪刀、直剪刀各1把，大鑷子、小鑷子各1把，眼科剪刀1把、探針1根、玻璃分針2根，大燒杯、小燒杯各1個(gè)，滴管1支，培養皿1個(gè)，棉線(xiàn)，任氏液，鋅銅叉。

      3. 實(shí)驗方法和步驟

      （1）破壞腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來(lái)水沖洗干凈。左手握住蟾蜍，用食指壓住頭部前端使頭前俯，右手持刺蛙針從枕骨大孔向前刺入顱腔，左右攪動(dòng)搗毀腦組織，然后將刺蛙針退到枕骨大孔，不拔出而是將其尖轉向后插入脊柱管中搗毀脊髓，插入椎管時(shí)，蟾蜍后肢立即失去緊張性，多數情況出現尿失禁。若腦脊髓破壞完全，可見(jiàn)蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。

      （2）剪除上肢和內臟：在骶髂關(guān)節上0.5～1.0cm處用粗剪刀剪斷脊柱。用鑷子夾住后端脊柱，以剪刀沿脊柱兩側剪除所有內臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及緊貼于脊柱兩側的坐骨神經(jīng)。

      （3）剝皮：左手用鑷子或直接用手捏住脊柱斷端（注意不要壓迫神經(jīng)），右手捏住斷端邊緣皮膚，向下剝去全部后肢皮膚，將標本置于盛有任氏液的培養皿中。將手和用過(guò)的器械洗凈后再進(jìn)行以下步驟。

      （4）分離兩腿：用玻璃分針沿脊柱兩側游離出兩條坐骨神經(jīng)，并于近脊柱處各扎一細線(xiàn)，然后在扎線(xiàn)與脊柱之間剪斷神經(jīng)。提著(zhù)神經(jīng)上的細線(xiàn)，將兩條坐骨神經(jīng)分別置于兩條大腿上，左手持脊柱，將骶骨翹起，將下位脊柱全部剪除。捏著(zhù)兩側髂骨向反方向分離，使恥骨聯(lián)合脫臼后，沿恥骨聯(lián)合正中將兩下肢剪開(kāi)，將一條腿浸于任氏液中備用，另一條置于浸有任氏液的玻璃板上。

      （5）游離坐骨神經(jīng)和剪斷股骨：認清坐骨神經(jīng)溝和腓腸肌的部位，用剪刀剪斷梨狀肌及其周?chē)慕Y締組織，左手提著(zhù)神經(jīng)上的細線(xiàn)，右手持剪刀或玻璃分針沿坐骨神經(jīng)溝細心剝離，直至將坐骨神經(jīng)剝離到腘窩。將游離干凈的坐骨神經(jīng)放在下腿上，沿膝關(guān)節的周?chē)鷮⒋笸鹊乃屑‰旒魯?，并用剪刀刮凈股骨下段附?zhù)的肌肉，在股骨上1/3處剪去上段股骨及所附的肌肉，這樣制成的稱(chēng)為坐骨神經(jīng)下腿標本。

      （6）游離腓腸?。涸谧巧窠?jīng)下腿標本的基礎上，用剪刀將跟腱的下端剪斷，在跟腱與肌肉交界處扎一條細線(xiàn)，左手提線(xiàn)，右手用剪刀游離腓腸肌，直到膝關(guān)節。最后用粗剪刀在膝關(guān)節下將小腿剪去，留下的即為坐骨神經(jīng)腓腸肌標本。做好的標本用鋅銅叉的兩極輕輕接觸坐骨神經(jīng)，如腓腸肌立即收縮，表示標本的興奮性良好，然后將標本放入任氏液中，待其興奮性穩定后再進(jìn)行實(shí)驗。

      4. 注意事項

      （1）已剝離皮膚的組織避免接觸皮膚毒液或其他不潔物。

      （2）分離神經(jīng)時(shí)，一定要用玻璃分針，不能隨便用刀、剪進(jìn)行操作。

      （3）不能過(guò)分牽拉神經(jīng)，以免造成損傷。

      （4）標本制備過(guò)程中應適當地用任氏液濕潤標本。

      （5）避免用手指或金屬器械接觸或夾持標本的神經(jīng)肌肉部分。

二、離體蛙心標本的制備

      1. 標本制備

      （1）暴露蛙心：取蟾蜍一只，毀壞腦和脊髓，將其仰臥固定在蛙板上。從劍突下將胸部皮膚向上剪開(kāi)或剪掉，然后剪掉胸骨，打開(kāi)心包，暴露心臟和動(dòng)脈干。

      （2）觀(guān)察心臟的解剖結構：在腹面可以看到一個(gè)心室，其上方有兩個(gè)心房，心室右上角連著(zhù)一個(gè)動(dòng)脈干，動(dòng)脈干根部膨大為動(dòng)脈圓錐，也稱(chēng)動(dòng)脈球。動(dòng)脈向上可分左右兩支。用玻璃針從動(dòng)脈干背部穿過(guò)，將心臟翻向頭側，在心臟背面兩心房下面，可以看到顏色較紫紅的膨大部分，為靜脈竇，這是兩棲類(lèi)動(dòng)物心臟的起搏點(diǎn)，觀(guān)察靜脈竇、心房、心室間收縮的先后關(guān)系。

      （3）心臟插管：先用絲線(xiàn)分別結扎右主動(dòng)脈、左右肺動(dòng)脈、前后腔靜脈，也可以在心臟下方繞一絲線(xiàn)，將上述血管一起結扎，但此結扎應特別小心，勿損傷靜脈竇，以免引起心臟驟停。結扎時(shí)，可用蛙心夾在心舒期夾住心尖，將心臟連線(xiàn)提起，看清楚再結扎。準備插管，在左主動(dòng)脈下穿一絲線(xiàn)，打一松結，用眼科剪在左主動(dòng)脈上向心剪斜口（一定要剪破動(dòng)脈內膜），讓心臟里的血盡可能流出（以免插管后血液凝固）。用任氏液將流出的血沖洗干凈后，把裝有任氏液的蛙心插管插入左主動(dòng)脈，插至主動(dòng)脈球后稍退出，再將插管沿主動(dòng)脈球后壁向心室中央方向插入，經(jīng)主動(dòng)脈瓣插入心室腔內。此時(shí)可見(jiàn)插管內液面隨心搏上下移動(dòng)。將預先打好的松結扎緊，并將線(xiàn)固定在插管壁上的玻璃小鉤上防止滑脫，用滴管吸去插管內液體，更換新鮮的任氏液，小心提起插管和心臟，在上述血管結扎處的下方剪去血管和所有的牽連組織，將心臟離體。此時(shí)，離體蛙心已制備成功，可供實(shí)驗。

      2. 注意事項

      （1）制備蛙心標本時(shí)，勿傷及靜脈竇。

      （2）每次換液時(shí)，蛙心套管內液面應保持同一高度。

      （3）隨時(shí)滴加任氏液于心臟表面使之保持濕潤。

三、離體主動(dòng)脈條

      1. 制備方法　取兔或大鼠一只，猛擊其頭致死，立即剖開(kāi)胸腔，分離胸主動(dòng)脈，盡可能于近心臟處把其切斷，迅速置于盛有克氏液并通以95%氧氣及5%二氧化碳的培養皿中，剔除血管外結締組織及脂肪，洗去凝血塊，輕輕套在較主動(dòng)脈稍小的玻璃棒上。然后用眼科剪把主動(dòng)脈作螺旋形剪開(kāi)，制成寬約3mm、長(cháng)1.5~2cm的主動(dòng)脈條，兩端分別用線(xiàn)結扎，置于盛有克氏液并通以95%氧氣及5%二氧化碳的恒溫37℃的麥氏浴管內，平穩90~120min后進(jìn)行實(shí)驗。也可把胸主動(dòng)脈剪成多個(gè)寬2mm的動(dòng)脈環(huán)代替血管條做實(shí)驗。

      2. 注意事項

      （1）本標本勿用手拿，應以鑷子夾取，且不可在空氣中暴露過(guò)久，以免失去敏感性。

      （2）克氏液必須用新鮮蒸餾水配制。

      （3）余下的動(dòng)脈條連同克氏液置于4℃冰箱中，1~2天內仍可用做實(shí)驗；采用大白鼠主動(dòng)脈條時(shí)，可制成寬2~2.5mm，長(cháng)2~3cm。

四、離體氣管標本制備

      1. 氣管連環(huán)標本　豚鼠1只，體重500g，用木槌擊斃，立即從腹面正中切開(kāi)皮膚和皮下組織，細心分離出氣管，自甲狀軟骨下剪下整段氣管，置于盛有Kerbs營(yíng)養溶液的平皿中，剪除氣管周?chē)M織。從軟骨環(huán)之間由前向后和由后向前進(jìn)行交叉橫切，均不完全切斷而保留一小段。從上到下約橫切10～15處。然后兩端縫上線(xiàn)，一端固定，另一端拉開(kāi)，即成氣管連環(huán)。

      2. 氣管螺旋條標本　將氣管由一端向另一端螺旋形剪成條狀，每2～3個(gè)軟骨環(huán)剪一個(gè)螺旋。亦可用一根直徑2～3mm的玻璃棒或竹棒，將氣管套在其上，用剪刀剪成或用手術(shù)刀切成螺旋狀。整個(gè)螺旋長(cháng)條可作一只實(shí)驗標本，也可用半段螺旋條做一標本。

      注意事項：分離氣管及制作氣管螺旋條標本時(shí)，動(dòng)作要敏捷而輕柔，切勿用鑷子夾傷氣管平滑肌。

  （本文轉載生物通）