實(shí)驗步驟:
二.雜交與顯色
1、將加入探針的雜交液先于50℃預熱,均勻涂于切片表面,加上硅化蓋玻片,放于濕盒中,50℃孵育12-16h。
2、1×SSC(含50%甲酰胺),50℃洗滌2次,每次10min。
3、2×SSC(含50%甲酰胺),37℃洗滌10min。
4、2×SSC(0.5ug/ml RNaseA),37℃洗滌30min。
5、1×SSC,50℃洗滌10min。
6、1×PBS(含0.1%Tween20),50℃洗滌2次,每次10min。
7、PBT室溫洗滌10min。
8、封閉液處理1-1.5h。
9、加抗體(用封閉劑按1:500比例稀釋?zhuān)?,均勻地涂于切片表面,放于濕盒中,室?-2h后4℃過(guò)夜(抗體1:500稀釋于1×封閉液)。
10、PBT洗滌3次,每次15min。
11、顯色緩沖液洗5min。
12、滴加顯色液,黑暗中顯色至適度??稍陲@微鏡下多次觀(guān)察。
13、顯色終止液洗10min,雙蒸水洗5次。
14、甲基綠(0.25%)滴加染色幾秒中,雙真水洗5min。
15、脫水封片。