試劑：

2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane， Sigma)、丙酮、二甲苯、酸性亞硫酸鈉（sodium bisulfite ）、蛋白酶K、2XSSC、0.1M HCl、70%乙醇、85％乙醇、100％乙醇

預處理程序：

1.  將載玻片浸入2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane， Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) 丙酮溶液中5分鐘，隨后在丙酮及蒸餾水中漂洗，自然干燥載玻片。

2.  從福爾馬林固定石蠟包埋組織中獲取多塊4微米切片，分別置于以上經(jīng)氨基烷基硅烷（aminoalkylsilane）處理過(guò)的載玻片上。

3.  將組織切片置于65℃下過(guò)夜烘烤。

4.  將組織切片浸于二甲苯中室溫脫蠟2次，每次10分鐘，隨后浸入100%乙醇中5分鐘。

5.  將組織切片依次室溫置于100％乙醇、85％乙醇和70％乙醇中各兩分鐘復水。將組織切片室溫浸入去離子水中3分鐘，用無(wú)絨紙巾吸取多余的水分。

6.  50℃下用30%[w/v] 酸性亞硫酸鈉（sodium bisulfite ）處理組織切片20－30分鐘。

7.  于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分鐘

8.  取0.4ml蛋白酶K儲存液（20mg/ml）溶于40ml 20XSSC(pH 7.0)得到蛋白酶K工作液（200μg/ml）；將組織切片浸泡在蛋白酶K工作液中，37℃下孵育20-30分鐘。

9.  組織切片經(jīng)蛋白酶K消化后，于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分鐘。

特別說(shuō)明：

為確保消化充分，可以自然干燥組織切片，將15μl DAPI復染劑滴加于組織切片區域，立即蓋上蓋玻片。暗處放置10-20分鐘后，在熒光顯微鏡下選用合適的濾片組觀(guān)察消化情況。

如果消化過(guò)度，可放棄本次FISH實(shí)驗，選擇新的組織切片重復實(shí)驗，縮短蛋白酶K消化時(shí)間；如果消化不充分，可將組織切片浸泡在2XSSC溶液中幫助脫落蓋玻片，蓋玻片脫落后，于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分鐘，然后將組織切片置于37℃蛋白酶K工作液中繼續消化5-20分鐘；如果消化適中，可將組織切片浸泡在2XSSC溶液中幫助脫落蓋玻片，蓋玻片脫落后，于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分鐘，繼續第9步實(shí)驗操作。

10.  將組織切片置于0.1M HCl中室溫浸泡5-10分鐘，于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分鐘。

11.  將組織切片玻片依次置于-20℃預冷的70%乙醇、85％乙醇和100％乙醇中各2分鐘脫水。

12.  將組織切片室溫浸入丙酮溶液中2分鐘。

13.  自然干燥玻片。

14.  加熱玻片至56℃。

15.  按照FISH操作步驟進(jìn)行FISH實(shí)驗。

（本文轉載丁香通）