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這些生化檢測常用方法,你都會(huì )嗎?


簡(jiǎn)述
     生化檢測(目前市場(chǎng)所說(shuō)的癌篩、腫瘤標志物、CCVD芯片檢測法等)簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),就是檢查發(fā)現您目前是否已患疾病,然后盡可能及早治療,避免再度惡化損害健康。這屬于檢測的第二個(gè)階段,屬于臨床醫學(xué)的范疇。

     原理
     生化檢測是利用生物或化學(xué)的方法來(lái)對血液進(jìn)行檢測分析,從而實(shí)現對人身體健康的定期掌握。主要包括肝功能(總蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比,總膽紅素,直接、間接膽紅素,轉氨酶);血脂(總膽固醇,甘油三酯,高、低密度脂蛋白,載脂蛋白);空腹血糖;腎功能(肌酐、尿素氮);尿酸;乳酸脫氫酶;肌酸肌酶等檢測項目;目前市場(chǎng)上的癌篩、CCVD芯片檢測等都是屬于生化檢測范疇,主要包括甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖類(lèi)抗原125(CA125)、糖類(lèi)抗原15-3(CA15-3)等腫瘤標志物的篩查,也只能通過(guò)提取血液實(shí)現檢測,可以將表面健康的人區分為可能患病者(陽(yáng)性)或可能無(wú)病者(陰性),篩查不具有診斷意義。

     常用生化檢測分析方法
     1.終點(diǎn)法檢測:常用的有總膽紅素(氧化法或重氮法)、結合膽紅素(氧化法或重氮法)、血清總蛋白(雙縮脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、總膽汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、總膽固醇(膽固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白膽固醇(直接測定法)、鈣(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、鎂(二甲苯胺藍法)等。以上項目中,除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而采用一點(diǎn)終點(diǎn)法外,其它測定項目 都可使用雙試劑故能選用兩點(diǎn)終點(diǎn)法,包括總蛋白、白蛋白測定均已有雙試劑可用。
     2.固定時(shí)間法:苦味酸法測定肌酐采用此法。
     3.連續監測法:對于酶活性測定一般應選用連續監測法,如丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨?;D移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項目如己糖激酶法測定葡萄糖、脲酶偶聯(lián)法測定尿素等,也可用連續監測法。
     4.透射比濁法:透射比濁法可用于測定產(chǎn)生濁度反應的項目,多數屬免疫比濁法,載脂蛋白、免疫球蛋白、補體、抗“O”、類(lèi)風(fēng)濕因子,以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結合珠蛋白、轉鐵蛋白等均可用此法。

     生化試劑優(yōu)缺點(diǎn)
     生化試劑,目前有單試劑、雙試劑,甚至有三試劑,其各自的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),中洪博元小編建議根據以下內容來(lái)進(jìn)行選擇。


     單試劑優(yōu)點(diǎn): 省事,方便,節省試劑位,生化分析儀同時(shí)測定項目數增加。 

          缺點(diǎn):抗干擾能力太差,但通過(guò)雙波長(cháng)測定可以減少干擾;而TG、CHO等Trinder反應的單試劑,更易受到血清中Vc的影響,造成結果偏低。
     

雙試劑 優(yōu)點(diǎn):抗干擾能力非常強、對于某些特殊項目,如HDL、CRE,如果單試劑,是無(wú)法完成的
                 缺點(diǎn):占更多的試劑位,增加試劑耗材成本。

     血清白蛋白(Alb)(溴甲酚綠法BCG)

試劑 
     1. 溴甲酚綠(BCG)貯存液:取BCG 419mg,用10ml 0.1mol/L NaOH溶解,加NaN3 100mg ,定容至1000mL。貯于棕色瓶備用。如用溴甲酚綠鈉鹽應稱(chēng)取432mg.加水溶解。 
     2. 0.1mol/L檸檬酸緩沖液(pH 4.2):分別配制0.1mol/L檸檬酸和檸檬酸鈉溶液,然后按12.3:7.7的體積比例混合。每1000ml混合液加入NaN3 100mg。 
     3. 30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液:取Brij-35 30g,加少量水,60℃水浴溶解,加水至100ml(此可用Tween-20或Tween-80代替)。 
     4. BCG應用液:BCG貯存液250ml,0.1mol/L檸檬酸緩沖(pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用Tween-20 8ml或Tween-80 10ml代替)混合而成。 5.標準蛋白溶液(10mg/ml):稱(chēng)取白蛋白1.00g,用生理鹽水。

白蛋白標準曲線(xiàn)繪制 
     (1) 稀釋白蛋白標準液:分別精密量取白蛋白標準液0.10 mL,0.20 mL,0.40 mL,0.60 mL于試管中,再在每個(gè)管中依次加入蒸餾水0.9 mL,0.8 mL,0.6 mL,0.4 mL,混勻,得到稀釋后白蛋白標準液含量分別為1.0 mg/ml,2.0 mg/ml,4.0 mg/ml,6.0 mg/ml。 

     (2) 分別精密量取每個(gè)不同濃度稀釋白蛋白標準液0.2mL于試管中,空白管加入生理鹽水0.2mL,設平行樣,再在每個(gè)管中加入BCG應用液5.0mL,混勻后以空白管調零,立即于紫外分光光度計測吸光值,吸收波長(cháng)620mn,繪制標準曲線(xiàn),得出線(xiàn)性方程。 

     (3) 樣品血清白蛋白測定:用生理鹽水按1:10的比例稀釋血清,取稀釋后的血清0.2ml按上述方法測出其吸光值,求得其白蛋白含量。

     注意事項:
     1.BCG是一種PH指示劑,變色域為PH3.8(顯黃色)~5.4(顯藍綠色),因此控制反應液的PH是本法測定的關(guān)鍵。
     2.配制BCG試劑也可用其他緩沖液如枸椽酸鹽或乳酸鹽緩沖液。但以琥
珀酸緩沖液的校正曲線(xiàn)通過(guò)原點(diǎn),線(xiàn)性好,靈敏度高,成為首選推薦配方。 
     3.試劑中的Brij-35也可用其他表面活性劑代替,如吐溫20或吐溫80,
終濃度為2ml,靈敏度和線(xiàn)性范圍不變。 
     4.當白蛋白標準與BCG結合后,溶液光徑1,在630處測定的吸光度應
為0.811±0.035,如達不到此值,表示靈敏度較差。 
     5.蛋白質(zhì)標準液是一個(gè)復雜的問(wèn)題,實(shí)驗證明,BCG不但與白蛋白呈色,
而且與血清中多種蛋白質(zhì)成分呈色,其中以球蛋白、運鐵蛋白、結合珠蛋白更為顯著(zhù),其反應速度較白蛋白稍慢。由于30S內呈色對白蛋白特異,故BCG與血清混合后,在30S內讀取吸光度,可明顯減少非特異性呈色反應。

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